[发明专利]一种用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白物质的方法

权利要求书

1.一种用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白物质的方法，其特征在于，依次包括如下步骤，

（1）对燕窝样品进行前处理：将燕窝样品分为两份，一份采用酸水解处理并定容作为酸水解样品，另一份采用碱水解处理并定容作为碱水解样品，将酸水解样品和碱水解样品混合，并定容，作为前处理样品；所述酸水解处理包括如下步骤：向燕窝样品中加入浓度为6mol/L的盐酸，并滴加3-5滴苯酚，氮吹后密封，在110℃水解24h，冷却、混匀、洗涤后定容；相对每20~25mg燕窝样品，所述盐酸的用量为8-15ml；所述碱水解处理包括如下步骤：向燕窝样品中加入浓度为4mol/L的氢氧化锂，氮吹后密封，在110℃水解24h，冷却、混匀、洗涤后定容，相对每35-45mg燕窝样品，所述氢氧化锂的用量为1.5-3ml；

（2）柱前衍生化处理：将所述前处理样品用OPA、FMOC分别对其中的一级、二级氨基酸进行柱前衍生化，获得待测样品；

（3）将待测样品和标准样品分别进行高效液相色谱检测分析，通过比较二者的检测图谱，判断待测样品中是否含有羟脯氨酸和/或肌氨酸，其中，所述标准样品中含有羟脯氨酸和/或肌氨酸的标准物；所述高效液相色谱检测分析的色谱条件包括：色谱柱为HPH-C18，柱温为45℃，以1.5 mL/min的流速进行梯度洗脱，检测器采用FLD荧光检测器；FLD荧光检测器进行检测的条件包括：0～10.35min时，EX=340nm，EM=450nm，增益为10；10.35min时波长切换到EX=266，EM305nm，增益为9；所述梯度洗脱采用的流动相由流动相A和流动相B组成，其中流动相A为10mM Na₂HPO₄，流动相B为体积比45:45:10的乙腈、甲醇和水的混合溶液；流动相进行梯度洗脱的洗脱程序如下：0-0.35min，流动相A、流动相B的体积百分比分别为98%、2%；13.4min时，流动相A、流动相B的体积百分比分别变换至43%、57%；13.5min时，流动相A、流动相B的体积百分比分别变换至57%、43%；14min时，流动相A、流动相B的体积百分比分别变换至0%、100%。

2.根据权利要求1所述的用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白物质的方法，其特征在于，切换波长的时间间隔控制在0.1min以上。

3.根据权利要求1所述的用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白物质的方法，其特征在于，步骤（3）中，待测样品进行高效液相色谱检测分析时采用自动进样器进样，进样程序包括：（1）吸取2.5uL硼酸盐缓冲液；（2）吸取0.5uL待测样品，在空气中混合，最大速度，2次，等待0.5min；（3）吸取0.5uL OPA，在空气中混合，最大速度，6次；（4）吸取0.5uL FMOC，在空气中混合，最大速度，6次；（5）吸取32uL H₂0，在空气中混合，最大速度，2次；进样。

4.根据权利要求1所述的用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白物质的方法，其特征在于，还包括绘制定量标准曲线并根据标准曲线计算燕窝样品中氨基酸含量的步骤，所述标准样品中包括如下标准物：天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、丝氨酸Ser、组氨酸His、甘氨酸Gly、苏氨酸Thr、精氨酸Arg、丙氨酸Ala、酪氨酸Tyr、胱氨酸Cys、缬氨酸Val、蛋氨酸Met、苯丙氨酸Phe、异亮氨酸Ile、亮氨酸Leu、赖氨酸Lys、脯氨酸Pro、天门冬酰胺Asn、谷氨酰胺Gln、色氨酸 Trp、羟脯氨酸Hyp和肌氨酸Sar。

5.根据权利要求1所述的用于检测燕窝有无掺杂其他含胶原蛋白物质的方法，其特征在于，天冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、丝氨酸Ser、组氨酸His、甘氨酸Gly、苏氨酸Thr、精氨酸Arg、丙氨酸Ala、酪氨酸Tyr、胱氨酸Cys、缬氨酸Val、蛋氨酸Met、苯丙氨酸Phe、异亮氨酸Ile、亮氨酸Leu、赖氨酸Lys和脯氨酸Pro配制成混合标准溶液；其余标准物分别单独配制成含单一标准物的标准溶液。