[发明专利]一组干酪乳杆菌基因敲除载体及其应用

权利要求书

1.一种用于构建干酪乳杆菌基因敲除突变株的工具盒，包括：

1)一个介导外源双链DNA敲除盒up-lox66-cat-lox71-down与染色体上同源序列之间进行同源重组的专用载体，命名为pMSP456，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；和

2)一个介导lox66和lox71位点之间的重组反应以便切除抗性基因的专用载体，命名为pMSPcre，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.权利要求1所述的工具盒在构建干酪乳杆菌基因敲除突变株中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，首先使载体pMSP456上的外源双链DNA敲除盒up-lox66-cat-lox71-down与染色体上同源序列之间发生重组反应，将目的基因替换为lox66-cat-lox71；再利用载体pMSPcre表达的重组酶Cre介导lox66和lox71位点发生重组反应将氯霉素抗性基因cat切除，将目的基因替换为一个lox72位点，实现目的基因的敲除，即可获得干酪乳杆菌敲除突变株。