[发明专利]王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法

权利要求书

1.一种王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

粗分：取王老吉凉茶浸膏，上样至AB-8型大孔吸附树脂柱；以3-5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以2-4个柱体积的体积百分数为70-80％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；蒸干得稠膏，备用；

细分：取上述稠膏，上样至HP20型大孔树脂柱；以3-5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以8-12个柱体积的体积百分数为15-25％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂得到组份2；以8-12个柱体积的体积百分数为35-45％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，将相同流份合并，依次得到组份3和组份4；以15-25个柱体积的体积百分数为60-80％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到组份5；

纯化：将上述得到的各组份经Sephadex LH-20凝胶柱、反相C18硅胶柱与正相硅胶柱分离纯化，并以液相色谱进行检测监控，得到单体化合物，即为王老吉凉茶指标性成分。

2.根据权利要求1所述的王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，所述粗分步骤中：取王老吉凉茶浸膏，上样至AB-8型大孔吸附树脂柱；以4个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以3个柱体积的体积百分数为75％的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；蒸干得稠膏，备用；

所述细分步骤中：取上述稠膏，上样至HP20型大孔树脂柱；以3-5个柱体积的水洗脱，弃去水液；再以10个柱体积的体积百分数为20％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂得到组份2；以10个柱体积的体积百分数为40％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，将相同流份合并，依次得到组份3和组份4；以20个柱体积的体积百分数为75％的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得到组份5。

3.根据权利要求1所述的王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，所述纯化步骤中：

将组份2上样至反相C18硅胶柱，先以甲醇-水梯度洗脱，再配合Sephadex LH-20凝胶柱和反相C18硅胶柱，其中反相C18硅胶柱以甲醇-水梯度洗脱和以甲醇-水等度洗脱，Sephadex LH-20凝胶柱以甲醇-水等度洗脱，并通过液相色谱进行检测监控，收集合并相同流份，纯化得到甘草酸、甘草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙、异绿原酸A、绿原酸。

4.根据权利要求1所述的王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，所述纯化步骤中：

将组份3上样至反相C18硅胶柱，先以甲醇-水梯度洗脱，再配合Sephadex LH-20凝胶柱、反相C18硅胶柱和正相硅胶柱，其中反相C18硅胶柱以甲醇-水等度洗脱和甲醇-水梯度洗脱，正相硅胶柱以氯仿-甲醇梯度洗脱，Sephadex LH-20凝胶柱以甲醇-水等度洗脱，并通过液相色谱进行检测监控，收集合并相同流份，纯化得到木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、水仙苷、芦丁、原儿茶酸、和儿茶醛。

5.根据权利要求1所述的王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，所述纯化步骤中：

将组份4上样至反相C18硅胶柱，先以甲醇-水梯度洗脱，再配合Sephadex LH-20凝胶柱和反相C18硅胶柱，其中反相C18硅胶柱以甲醇-水梯度洗脱和以甲醇-水等度洗脱，Sephadex LH-20凝胶柱以甲醇-水等度洗脱，并通过液相色谱进行检测监控，收集合并相同流份，纯化得到咖啡酸、迷迭香酸、三叶豆苷、和山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖。

6.根据权利要求1所述的王老吉凉茶指标性成分的分离纯化方法，其特征在于，所述纯化步骤中：

将组份5上样至Sephadex LH-20凝胶柱，先以氯仿-甲醇等度洗脱，再配合反相C18硅胶柱和Sephadex LH-20凝胶柱，以甲醇-水等度洗脱，并通过液相色谱进行检测监控，收集合并相同流份，纯化得到迷迭香酸甲酯、β-香树脂醇。