[发明专利]一种无烟气烟草制品中烟碱和降烟碱手性分析合相色谱‑串联质谱法

说明书

技术领域

本发明涉及无烟气烟草制品化学成分测定方法，具体涉及一种无烟气烟草制品中烟碱和降烟碱手性分析合相色谱串联质谱法。

背景技术

烟碱和降烟碱，是存在于茄科植物中的主要生物碱，也是烟草的重要成分之一。烟碱和降烟碱分子含有一个手性中心，所以有两个对映体：S-(-)-烟碱，R-(+)-烟碱，S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱。烟碱和降烟碱的两个对映体具有完全不同含量、代谢机理和生理特性。因此需进行无烟气烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析。

目前，文献报道烟碱和降烟碱对映异构体的测定方法主要有气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、多维气相色谱-质谱联用法（MDGC-MS）、毛细管电泳法（CE）等，但是，GC-MS和MDGC-MS需要在前处理过程中进行衍生化，费时费力，CE仅使用保留时间进行定性，定性能力相对较差，容易出现假阳性结果。因此有必要开发一种灵敏度高、精密度好、适合大批量准确定量无烟气烟草制品中S-(-)-烟碱，R-(+)-烟碱，S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱的方法。

手性柱-合相色谱串联质谱在异构体分离方面有着明显的优势，因此通过大量实验建立了无烟气烟草制品中烟碱和降烟碱手性的手性柱-合相色谱串联质谱分析方法，该方法更适合用于大量样品中烟碱和降烟碱的手性分析。

发明内容

本发明的目的正是以烟碱和降烟碱为研究对象，对无烟气烟草制品样品进行了前处理方法研究，建立了串联手性柱-合相色谱串联质谱法检测无烟气烟草制品中烟碱和降烟碱旋光异构体的分析方法，实现了对无烟气烟草制品中烟碱和降烟碱旋光对映体的准确测定。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：将无烟气烟草制品样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用正己烷/甲醇溶液萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用串联手性柱-合相色谱串联质谱法分析，采用峰面积归一化法定量检测无烟气烟草制品中R-(+)-烟碱占总烟碱的比例，S-(-)-降烟碱占总降烟碱的比例。具体步骤如下：

1. 标准溶液的配制：称取约100.0 mg的S-(-)-烟碱，R-(+)-烟碱，S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为2.0 mg/mL的标准储备液；利用标准储备液稀释配制S-(-)-烟碱，R-(+)-烟碱，S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱浓度为100 μg/mL的混合标准溶液。2.无烟气烟草制品样品的混匀：将无烟气烟草制品样品置于40 ℃烘箱中，1小时后将无烟气烟草制品取出，粉碎后过0.45毫米孔径标准筛。

3. 无烟气烟草制品样品的萃取：称取0.3 g已粉碎的样品于15 mL具塞离心管中，加入2.0 mL 5%（质量比）的氢氧化钠溶液，涡旋1 min混匀后静置10 min浸润样品。取10 mL正己烷/甲醇溶液（98:2，V/V）溶液到离心管中，并于旋涡混合器上以4000 rpm速度振荡30 min。

4. 萃取液的净化：取1.5 mL上清液于2 mL净化离心管中（内含150 mg无水硫酸镁，50mg PSA吸附剂，25 mg GCB吸附剂，统称基质分散固相萃取材料），于旋涡混合器上以4000 rpm振荡2 min，以10000 rpm离心1 min。取上清液过0.45 μm有机相滤膜后进液相分析。

5. 串联手性柱-合相色谱串联质谱法条件：分析柱1为Trefoil CEL1柱（柱长 150 mm ，内径3.0 mm ，固定相粒径2.5 µm），分析柱2为Chiralcel OD-H液相色谱柱(柱长 250 mm ，内径4.6 mm ，固定相粒径5 µm)；流动相A为：CO₂，流动相B：含0.05%异丙胺的甲醇；流速为1.0 mL/min；梯度洗脱条件为：0.0 min，97% A；0.5 min，97% A；8.0 min，92% A；12.0 min，92% A； 30.0 min，90% A。柱温40 ℃；进样室温度：10 ℃；进样体积2 μL；背压：1600 psi；ISM补偿流路流动相为含0.1%甲酸的甲醇，流速为0.3 mL/min。分析时间总计30 min。质谱条件：离子源：电喷雾源，扫描方式为正离子扫描，离子源温度为300 ℃，电喷雾电压为5000 V，雾化气压力为40 psi；检测方式：多反应监测（MRM）；MRM参数见下表。通过对峰面积进行归一化定量R-(+)-烟碱占总烟碱的比例，S-(-)-降烟碱占总降烟碱的比例。