[发明专利]一种基于Npro蛋白检测猪非典型瘟病毒抗体的ELISA试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于N^pro蛋白检测猪非典型瘟病毒抗体的ELISA试剂盒，包括SEQ ID NO.1所示序列的猪非典型瘟病毒N^pro蛋白包被的反应板、酶标抗体、显色液、终止液、阳性血清和阴性血清。本发明首次创建了检测猪非典型瘟病毒抗体的ELISA试剂盒，而且该试剂盒可快速、特异、灵敏地检测血清中猪非典型瘟病毒的抗体，其检测血清抗体灵敏度为1：1000。本发明试剂盒使用方法简单、成本低廉，反应结果易于观察，特异性好，适用于猪非典型瘟病毒感染的监测、流行病学调查以及兽医临床样本的检测，适合大范围推广应用。

技术领域

本发明涉及兽医免疫检测领域，更具体地，涉及一种基于N^pro蛋白检测猪非典型瘟病毒抗体的ELISA试剂盒。

背景技术

仔猪先天性震颤发生于新生仔猪，特征是仔猪在出生后观察到骨骼肌阵挛收缩，出现震颤现象，症状严重的会因饥饿而导致死亡。2015年，Hause研究小组证实了猪非典型瘟病毒(Atypical porcine pestivirus，APPV)是仔猪先天性震颤的病原。随后，德国、荷兰、奥地利等多个国家先后发现猪群存在APPV流行。华南农业大学宁章勇课题组首次发现了我国猪群APPV感染的发生，并分离了APPV GD1和GD2毒株，但是到目前为止我国猪群APPV流行的情况仍然不清楚。目前对于猪非典型瘟病毒感染尚无疫苗可以应用，所以目前缺乏检测猪非典型瘟病毒抗体的相关试剂盒。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种基于N^pro蛋白检测猪非典型瘟病毒抗体的ELISA试剂盒。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种检测猪非典型瘟病毒抗体的ELISA试剂盒，包括SEQ ID NO.1所示序列的猪非典型瘟病毒N^pro蛋白包被的反应板、酶标抗体、显色液、终止液、阳性血清和阴性血清。

优选地，所述猪非典型瘟病毒N^pro蛋白的制备方法为：将SEQ ID NO.2所示序列的猪非典型瘟病毒N^pro基因克隆至原核表达载体上，将得到的重组原核表达载体转化感受态细胞，筛选阳性重组菌株，诱导阳性重组菌株获得N^pro蛋白。

优选地，所述原核表达载体为pET-32a(+)。

优选地，所述感受态细胞为BL21大肠杆菌。

优选地，使用IPTG诱导阳性重组菌株表达目的蛋白，IPTG终浓度为1.0 mmol/L、温度为37 ℃条件下诱导表达8小时。

优选地，所述包被方法为：10 μg/mL的N^pro蛋白按每孔100 μL加入反应板中，4 ℃过夜包被，次日PBST洗板3次，拍干。

优选地，所述显色液为TMB，所述终止液为浓度2 mol/L的H₂SO₄。

优选地，所述酶标抗体为HRP标记兔抗猪IgG。

优选地，所述阳性血清为通过猪非典型瘟病毒攻毒后的猪血清；阴性血清为健康猪血清。

优选地，诱导阳性重组菌株后，收集菌液，将菌液在12000 r/min条件下离心3min，菌体用PBS按1:10（V/V）重悬。将悬浮菌液在冰浴条件下超声破碎60次菌体破碎条件为，冰浴条件下超声破碎60次，3 sec/次，每次间隔5 sec。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：