[发明专利]GLP-1样化合物的生物学活性的体外检定方法

权利要求书

1.体外检定GLP-1样化合物的生物学活性的方法，包括以下步骤：

(1)将待测化合物用含有IBMX和BSA的PBS作为稀释液进行梯度稀释，所述稀释液中的IBMX为0.2-5.0mmol/L；

(2)将经过梯度稀释的待测化合物加载至生长有U2OS/GLP1R细胞的多孔板中进行反应，所述细胞在其表面表达GLP-1R与荧光标记的偶联体，所述荧光标记偶联在GLP-1R的C末端；所述多孔板的孔中的U2OS/GLP1R细胞已生长至50％以上汇集；

(3)检测多孔板的荧光。

2.根据权利要求1所述的方法，检测到的多孔板荧光数据用四参数曲线拟合。

3.根据权利要求2所述的方法，梯度稀释确保四参数曲线的R²≥0.95。

4.根据权利要求2所述的方法，梯度稀释确保四参数曲线的R²≥0.98。

5.根据权利要求2所述的方法，梯度稀释确保四参数曲线的R²≥0.99。

6.根据权利要求2所述的方法，所述的梯度稀释有7-9个梯度，在四参数拟合曲线上为下平台2-3个梯度、上升期2-3个梯度、以及上平台2-3个梯度。

7.根据权利要求6所述的方法，所述梯度稀释有8个梯度。

8.根据权利要求1所述的方法，所述梯度稀释中的最大梯度，也即起始反应浓度，是在50-1000ng/ml的范围内。

9.根据权利要求8所述的方法，所述起始反应浓度是在100-1000ng/ml的范围内。

10.根据权利要求8所述的方法，所述起始反应浓度是在100-900ng/ml的范围内。

11.根据权利要求8所述的方法，所述起始反应浓度是在200-600ng/ml的范围内。

12.根据权利要求1所述的方法，所述检测多孔板的荧光是通过高内涵设备进行检测。

13.根据权利要求1所述的方法，U2OS/GLP1R细胞在多孔板上的接种量是6000-10000个/孔。

14.根据权利要求1所述的方法，所述稀释液中的IBMX为0.5-5.0mmol/L。

15.根据权利要求1所述的方法，所述稀释液中的IBMX为0.3-3.0mmol/L。

16.根据权利要求1所述的方法，所述稀释液中的IBMX为0.5-1.5mmol/L。

17.根据权利要求1所述的方法，所述稀释液中的IBMX为1mmol/L。

18.根据权利要求1所述的方法，所述稀释液中的BSA为0.02-10％重量。

19.根据权利要求18所述的方法，所述BSA为0.1％重量。

20.根据权利要求1所述的方法，所述稀释液是现配现用。

21.根据权利要求1所述的方法，将待测化合物添加至多孔板的步骤，是各孔同步加入经过梯度稀释的待测化合物来完成。

22.根据权利要求21所述的方法，所述同步是在5分钟之内完成多孔板所有孔的添加。