[发明专利]一种人肾小管上皮细胞分离及培养方法在审
| 申请号： | 201710703444.5 | 申请日： | 2017-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN109402041A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214434 江苏省无锡市江阴市东*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人肾小管上皮细胞 完全培养基 研磨 筛网过滤 细胞沉淀 组织标本 混合酶 活性高 培养瓶 组织块 剪碎 双抗 预冷 重悬 接种 消化 生长 | ||
1.一种人肾小管上皮细胞分离及培养方法，包括步骤：(a)含双抗预冷PBS清洗组织标本；(b)剪碎并研磨组织，收集研磨后的组织块；(c)混合酶消化，筛网过滤，收集滤液离心；(d)Percoll分离；(e)完全培养基重悬细胞沉淀，接种于培养瓶中；(f)培养数天后更换混合完全培养基继续培养。
2.根据权利要求1所述的人肾小管上皮细胞分离及培养方法，其特征在于，所述的组织为离体2-4 h的新鲜组织。
3.根据权利要求1所述的人肾小管上皮细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤b中研磨收集组织块的方式为组织块置于重叠的孔径分别为80目和100目的不锈钢筛网上，用注射器内芯在80目筛网上研磨剪碎组织块，无菌PBS充分冲洗筛网，收集100目不锈钢筛网上的组织块。
4.根据权利要求1所述的人肾小管上皮细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤c中混合酶为0.025-0.05% 胰蛋白酶、0.05-0.1% IV胶原酶和0.05-0.075% I型胶原酶，消化时间为8-10 min/次。
5.根据权利要求1所述的人肾小管上皮细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤c中筛网孔径大小为200目。
6.根据权利要求1所述的人肾小管上皮细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤d中Percoll分离方式为选择浓度为45%的Percoll分离液，4℃，15000 ×g~18000×g离心25-30 min，离心后吸取近管底第2层。
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