[发明专利]用于显微注射的蜜蜂卵移取方法

说明书

本发明涉及一种用于显微注射的蜜蜂卵移取方法，首先利用蜂王产卵的生物学特性进行限王产卵，然后利用蜂卵直立黏在巢房底部的特点以及蜂蜡的粘性，用移虫针铲出蜂卵底部的蜂蜡，将其粘在巢础条上。本发明对大量取自1小时内蜂卵进行转移，取得孵化率达94%的效果，解决了1小时内蜂卵孵化率低的难题，提供了一种高效移取蜜蜂卵的方法。可以无伤害转移大量1小时内的蜂卵，为蜜蜂基因组编辑技术在蜜蜂育种领域中的应用提供方法支持。

技术领域

本发明涉及一种蜜蜂卵的移取方法，具体涉及一种用于显微注射的蜜蜂卵移取方法，属于蜜蜂育种技术领域。

背景技术

蜜蜂是一种重要的经济昆虫，其产品及其制品在保健行业和医疗领域起着越来越重要的作用。同时蜜蜂又是植物重要的传粉者，其授粉价值和生态作用更是不可估量。而作为重要的模式生物，在蜜蜂生物学基础研究和基因功能研究等方面却远远落后于其他模式生物。分析其原因可以发现，在蜜蜂领域内缺少行之有效的基因编辑工具是造成其基因功能研究长期落后于其他模式昆虫的主要原因。尽管已经有很多研究者探索适合蜜蜂基因组编辑操作的方法，例如：精子介导法、显微注射法、电穿孔法、转座子载体法、Crispr/Cas9技术，这些基因编辑的方法都能有助于我们深入研究蜜蜂复杂的社会行为和级型分化现象，同时也将会加快优良性状分子育种的进程。但是这些方法都建立在取得完好的蜂卵上。特别是取得1小时及1小时内的蜂卵。一方面有成千上万只蜜蜂保护的蜂卵不像其它产在树叶下或水塘边的昆虫卵对恶劣的环境有较强的适应性，一旦长时间离开蜂群，蜂卵很容易死亡或者发育不正常。另一方面，蜂卵的卵壳较薄且有韧性，黏在巢房底部很难操作。即便能通过取卵工具将蜂卵取出转移，也很难保证有较高的孵化率。在体式显微镜下观察这些未孵化的蜂卵，可以看到蜂卵体表有一些机械伤口，这些伤口是肉眼所看不到的。所以要大量取1小时内的蜂卵进行转移并保证90%以上的孵化率成为阻碍科研人员进行蜂卵研究的主要难题。此难题若无法突破，即便是高效便捷的Crispr/Cas9技术也无法在蜜蜂中开展应用，而想通过蜜蜂基因组编辑技术加快蜜蜂优良性状分子筛选以及培育抗病高产新品种的愿望也将梦碎于此。甚至阻碍科研人员进一步研究蜜蜂复杂社会行为与蜜蜂特殊生物学现象的基础研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于显微注射的蜜蜂卵移取方法。用于解决大量移取1小时内蜂卵， 且孵化率不低于90%，为蜜蜂育种工作中的蜂卵研究奠定基础。

为实现本发明目的采用如下技术方案：

本发明用于显微注射的蜜蜂卵移取方法，其特征在于移取步骤如下：

（1）在新巢脾上用针式囚王笼限制蜂王24小时；

（2）将步骤（1）的针式囚王笼转移到该新巢脾的其它位置，限制蜂王产卵1个小时；所述其它位置，即除原位置外的任意位置；

（3）割下步骤（2）针式囚王笼下巢脾中的产卵区，在体式显微镜下用移虫针铲下带有蜂卵的蜂蜡，转移出巢房；

（4）另取巢础，压成厚度为1mm的薄片，并切成条状，黏在培养皿上；

（5）将步骤（3）中带有蜂卵的移虫针，转移到步骤（4）黏在培养皿上巢础条的边缘上，将带有蜂卵的蜂蜡黏在巢础条上，即为用于显微注射的蜜蜂卵。

其中，步骤（1）所述蜂王，选用开始产卵后不超过六个月、产卵力强的蜂王；

步骤（1）所述新巢脾，选用蜂群刚筑好的新巢脾；

步骤（1）所述的限制蜂王24小时，限制蜂王的同时对蜂群进行奖励饲喂。

所述巢脾、针式囚王笼、巢础、移虫针、培养皿均由市场购得。

为了探索不同处理条件对蜂卵孵化率的影响，我们对转移的蜂卵和注射无菌水的蜂卵进行孵化数目统计，统计结果如表1所示。

表1 不同处理条件对蜂卵孵化率的影响