[发明专利]一种生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的方法

权利要求书

1.一种多肽在生产反式-4-羟基-L-脯氨酸或以反式-4-羟基-L-脯氨酸为前体的下游产物中的用途，其特征在于，所述多肽是：

(a1)SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽，并且具有催化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的功能；或

(b1)从SEQ ID NO:1所示氨基酸序列多肽衍生的多肽，由SEQ ID NO:1所示氨基酸序列在C端带有6个his标签而形成，并且具有(a1)所述多肽的功能。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述多肽具有脯氨酸-4-羟化酶活性，粗酶比酶活为≥50U/mg。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述脯氨酸4-羟化酶纯酶比酶活为≥80U/mg。

5.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述多肽用于生产反式-4-羟基-L-脯氨酸。

6.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述以反式-4-羟基-L-脯氨酸为前体的下游产物是碳青霉烯类抗生素侧链。

7.一种反式-4-羟基-L-脯氨酸生产菌株，其特征在于，所述菌株表达以下多肽：

(a1)SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽，并且具有催化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的功能；或

(b1)从SEQ ID NO:1所示氨基酸序列多肽衍生的多肽，由SEQ ID NO:1所示氨基酸序列在C端带有6个his标签而形成，并且具有(a1)所述多肽的功能。

8.如权利要求7所述的生产菌株，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

9.如权利要求7所述的生产菌株，其特征在于，所述的生产菌株是细菌或真菌。

10.如权利要求7所述的生产菌株，其特征在于，所述的生产菌株选自下组：大肠杆菌(E.coli)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)、黄色短杆菌(Brevibacteriumflavum)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

11.如权利要求7所述的生产菌株，其特征在于，所述生产菌株为解除谷氨酸-5-激酶的L-脯氨酸的反馈抑制的菌株。

12.如权利要求7所述的生产菌株，其特征在于，所述的生产菌株为增强谷氨酸-5-激酶和/或谷氨酸半醛脱氢酶的活性的菌株。

13.如权利要求7所述的生产菌株，其特征在于，所述的生产菌株为过表达ProB74谷氨酸-5-激酶和/或ProA谷氨酸半醛脱氢酶的菌株。

14.如权利要求7所述的生产菌株，其特征在于，所述的生产菌株为转染了pSWP2质粒的E.coli MG1655菌株。

15.如权利要求7所述的生产菌株，其特征在于，所述的生产菌株发酵生产反式-4-羟基-L-脯氨酸，30h产量≥20g/L。