[发明专利]一株高产内毒素蛋白的铜绿假单胞菌及其应用

说明书

本发明公开了一株高产内毒素蛋白的铜绿假单胞菌，属于微生物菌株及其应用领域。所述的铜绿假单胞菌(Pseudomonas Aeruginosa)，PA‑393，已于2015年08月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO.11267。本发明筛选得到的铜绿假单胞菌PA‑393，在内毒素蛋白生产培养基中发酵22h，能产生大量的内毒素蛋白，蛋白含量约占内毒素总量的52.3％，远远高于其它标准菌株和临床筛选菌株(P＜0.05)。解决了目前用于制备铜绿假单胞菌内毒素蛋白的菌株，内毒素蛋白含量较低，以及蛋白中杂质较多而引起的内毒素蛋白免疫效果降低、机体不良反应的问题。本发明的铜绿假单胞菌PA‑393可以作为内毒素蛋白制备的生产菌株，应用于防御铜绿假单胞菌感染的免疫领域。

技术领域

本发明属于微生物菌株及其应用领域，具体涉及一株高产内毒素蛋白的铜绿假单胞菌及其应用。

背景技术

铜绿假单胞菌(Pseudomonas Aeruginosa，PA)又称绿脓杆菌，属假单胞菌属，广泛分布于自然界及正常人的皮肤、呼吸道和肠道，是临床上常见的条件致病菌，当机体免疫功能受损或缺损时，可引起严重的甚至致死性的感染。患代谢性疾病、血液病和恶性肿瘤的患者以及术后或某些治疗后的患者易感染此菌，可引起术后伤口感染、褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等。铜绿假单胞菌引起的感染病灶可导致血行传播而发生菌血症和败血症，烧伤后感染了绿脓杆菌可造成死亡。铜绿假单胞菌已成为医院内感染的重要病原菌之一，亦是战伤感染的常见致病菌。铜绿假单胞菌还可引起禽畜败血性死亡等，对人体健康和养殖业造成了较大的危害和经济损失。

内毒素蛋白(Endotoxin Protein，EP)是铜绿假单胞菌的主要免疫源性物质，在该菌自溶时释放到培养液里，因此包含于铜绿假单胞菌培养液上清里。内毒素蛋白可刺激机体产生体液性抗体、具有激发机体网状内皮系统细胞的活力和增强巨噬细胞吞噬功能的作用；同时，内毒素蛋白还具有毒性低和发热性弱的特点,对防治铜绿假单胞菌的感染是非常有效的。然而目前已有的用于制备铜绿假单胞菌内毒素蛋白的菌株，其产内毒素蛋白的含量较低，杂质较多，而过多的杂质又会降低内毒素蛋白的免疫效果，还会引起机体的不良反应。因此，筛选到具有高产内毒素蛋白特性的铜绿假单胞菌是十分有意义的。

发明内容

本发明的目的是提供一株可用于制备内毒素蛋白的铜绿假单胞菌(PseudomonasAeruginosa)PA-393菌株，所述铜绿假单胞菌PA-393菌株筛选自哈尔滨医科大学附属第二医院。

本发明提供的铜绿假单胞菌PA-393菌株已于2015年08月24日保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCC NO.11267。

本发明所述的铜绿假单胞菌PA-393菌株具有下述性质：

1.菌落形态：血液琼脂平板培养基上37℃培养18～24h，肉眼观察，菌落为光滑微隆起、边缘整齐、灰色、表面湿润、不透明、直径约1.5～2.5mm；镜检为革兰氏阴性短杆状。

2.培养特性：血液琼脂平板培养基上37℃培养18～24h，有溶血圈出现；内毒素蛋白生产培养基中37℃培养18～24h，产绿色色素，培养基均匀混浊，呈黄绿色。

3.生理生化特征：氧化酶实验阳性，MR试验和VP试验阴性，甘露醇试验阴性，能分解葡萄糖产酸不产气，能液化明胶和利用枸橼酸盐，不产硫化氢。而且，所述铜绿假单胞菌PA-393菌株在内毒素蛋白生产培养基中37℃发酵22h，能产生大量的内毒素蛋白，蛋白含量约占内毒素总量的52.3％。

本发明的有益效果

1.本发明提供了一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas Aeruginosa)PA-393菌株，该菌株可高产内毒素蛋白，其中蛋白质含量约为52.3％，远远高于其它标准菌株和临床筛选菌株(P＜0.05)。