[发明专利]蛋白酶抗性及催化效率提高的植酸酶突变体F89S/K226H及应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程研究领域，具体涉及蛋白酶抗性及催化效率提高的植酸酶突变体F89S/K226H及应用。

背景技术

植酸酶可以提高磷的生物可利用性，一些细菌植酸酶对植酸盐具有高度特异性，而曲霉等真菌来源植酸酶显示了广泛的底物特异性，可作用于AMP、ADP、ATP、三聚磷酸钠、焦磷酸、乙酰磷酸、对硝基苯磷酸和质酸钠等。

通过突变技术可以改善酶的热稳定性、pH耐受性及催化性能。植酸酶对蛋白酶的敏感性通常会降低单胃动物肠道中植酸酶的活性和稳定性，限制了植酸酶在工业上的应用范围。胃蛋白酶和胰蛋白酶是具有特定底物选择性的消化酶。胃蛋白酶优先切割F，L，E和K羧基端的肽键，而胰蛋白酶则特异降解K和R后面的肽健。本发明通过定点突变的方法干扰胰蛋白酶和胃蛋白酶对植酸酶特定位点的切割，提高了植酸酶的胰蛋白酶和胃蛋白酶抗性及催化活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种胰蛋白酶和胃蛋白酶抗性及催化效率提高的植酸酶。

本发明另一目的是提供编码上述胰蛋白酶和胃蛋白酶抗性及催化效率提高的植酸酶基因。

本发明的另一目的是提供包含上述胰蛋白酶和胃蛋白酶抗性及催化效率提高的植酸酶基因的重组载体。

本发明的另一目的是提供包含上述胰蛋白酶和胃蛋白酶抗性及催化效率提高的植酸酶基因的重组菌株。

本发明的另一目的是提供上述胰蛋白酶和胃蛋白酶抗性及催化效率提高的植酸酶基因的应用。

本发明对小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)来源植酸酶YeAPPA基因进行定点突变。SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列是植酸酶YeAPPA的成熟蛋白序列。SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列编码YeAPPA的成熟蛋白。

SEQ ID NO.1

MSVAKRNLHLSALTLIMGCFTAGAAPIATPPASYTLERVVILSRHGVRSPTKQTQLMNDVTPDKWPLWPVKAGYLTPRRAELVTLMGGFYGDYFRSQGLLSAGCPVDGSVYAQADVDQRTRLTGQAFLDGIAPDCGLKVHYQADLKKVDPLFHTVEAGVCKLDSAKTHQAVEERLGGPLSDLSQRYAKPFAQMGEVLNFAASPYCKSLQKNGKTCDFATFTANEIKVNEEGTKVSLSGPLALSSTLGEIFLLQDSQAMPDVAWHRLSGEENWVSLLSLRNAQFDLMAKTPYIARHKGTPLLQQIDTALVLQRDAQGQTLPLSPQTKLLFLGGHDTNIANIAGMLGANWQLPQQPDNTPPGGGLVFELWQNPDNHQRYVAVKMFYQTMDQLRNAEKLDMKNNPAKIVPITIEGCENEGDNKLCQLETFQKKVAQVIEPACHI.

SEQ ID NO.2