[发明专利]一种含重组耐高温葡萄糖异构酶细胞的固定化方法

权利要求书

1.一种含重组耐高温葡萄糖异构酶细胞的固定化方法，其特征在于所述方法为：将含耐高温葡萄糖异构酶基因的重组大肠杆菌BL21 (DE3)经发酵培养获得的湿菌体用pH值6.5-7.5的缓冲液制成菌悬液；向菌悬液中添加硅藻土，搅拌混匀，再加入聚乙烯亚胺室温搅拌絮凝1~2 h，然后加入三羟甲基磷，在25^oC、100 r/min搅拌交联1~2 h后，抽滤，滤饼室温风干后粉碎成粒，得到所述含耐高温葡萄糖异构酶固定化细胞颗粒；所述硅藻土与菌悬液中湿菌体重量比为0.05：1；所述耐高温葡萄糖异构酶基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.2，编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述缓冲液为pH 6.5~7.5、50 mM的Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液，所述缓冲液体积用量以湿菌体湿重计为50mL/6g；所述三羟甲基磷以体积浓度30%水溶液形式加入，体积用量以湿菌体重量计为0.25mL/6g；所述聚乙烯亚胺以体积浓度5%水溶液形式加入，体积用量以湿菌体重量计为2 mL/6g；

所述湿菌体按如下方法制备：将含重组耐高温葡萄糖异构酶基因的大肠杆菌BL21(DE3)接种至含100 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基，于37^oC、150 r/min培养10 h，获得种子液；将种子液以体积浓度2-5%的接种量接种到含3 L发酵培养基的5 L发酵罐中，于37^oC、500 r/min、1.33 vvm、罐压0.05 Mpa条件下发酵3.5 h，发酵过程用氨水和磷酸调节pH为7.0，再将发酵罐温度降低至28^oC，加入终浓度10 g/L乳糖继续发酵10 h，离心收集湿菌体；所述发酵培养基组成为：胰蛋白胨15 g/L、酵母粉12 g/L、NaCl 10 g/L、甘油12 g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、硫酸铵5 g/L、三水合磷酸氢二钾2.3 g/L、氯化锰3.8 g/L、溶剂为水，pH值自然。