[发明专利]嗜铬细胞瘤诊断试剂盒及其使用方法有效
申请号: | 201710716931.5 | 申请日: | 2017-08-21 |
公开(公告)号: | CN107462647B | 公开(公告)日: | 2020-08-28 |
发明(设计)人: | 丁敏;邹文毕;甄乾娜;张晓清;吕文静;陈霄;韩润川 | 申请(专利权)人: | 重庆医科大学 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/74 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 400016*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 嗜铬细胞瘤 诊断 试剂盒 及其 使用方法 | ||
1.一种非诊断目的的儿茶酚胺代谢物的检测方法,其特征在于:所述检测方法使用试剂盒进行检测,所述试剂盒包括以下试剂:
(1)样品预处理试剂:
①10%氨水-甲醇溶液,所述氨水与甲醇的体积比为3∶1;
②0.18mol/L氢氧化钾甲醇溶液;
③10mmol/L醋酸-甲醇溶液,所述醋酸与甲醇的体积比为9∶1;
④10mmol/L磷酸铵溶液;
⑤0.20mol/L醋酸溶液;
(2)标准品储备液:含有甲氧基去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、3-甲氧基酪胺以及肌酐标准品的醋酸溶液;
(3)流动相:
流动相A:70mmol/L NaH2PO4溶液;
流动相B:甲醇,所述甲醇为色谱纯;
所述试剂盒检测的标本为随机尿样本,所述样本预处理方法为固相萃取法,所选的固相萃取柱为SampliQ Silica SCX萃取小柱;所述固相萃取法具体为:取500μL随机尿,加入5mL超纯水,200μL0.20mol/L醋酸,混匀;用5mL10%氨水-甲醇,2mL0.18mol/L氢氧化钾甲醇溶液,2mL超纯水依次活化固相萃取小柱后,将上述样本混匀上样,控制流速为1~2mL/min;用4mL 10mmol/L醋酸-甲醇,4mL10mmol/L磷酸铵,4mL超纯水依次淋洗小柱;2mL氨水-甲醇溶液洗脱,将洗脱液真空旋干后用200μL 0.20mol/L醋酸溶液复溶;
所述试剂盒采用高效液相色谱检测随机尿中的甲氧基去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、3-甲氧基酪胺和肌酐;其中,甲氧基去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、3-甲氧基酪胺采用荧光检测器检测,激发波长:278nm,发射波长:320nm;肌酐采用紫外检测器检测,检测波长:235nm;所述高效液相色谱检测采用梯度洗脱方法,所述的梯度洗脱程序见下表,流动相流速为0.8mL/min,进样量为50μL;
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