[发明专利]一种基于智能型纳米发光微粒标记放大的化学发光免疫分析法及其应用

权利要求书

1.一种基于温度敏感型纳米发光微粒标记放大的化学发光免疫分析法，其特征在于包括将一株待测抗原的抗体共价偶联到温度敏感型纳米发光微粒表面的羧基上，形成具有放大标记效果的温度敏感型纳米发光微粒；将待测抗原的另一株抗体直接或者间接包被在固相载体上，加入温度敏感型纳米发光微粒以及含待测抗原的样本，通过抗体-抗原-抗体的相互作用，形成固相载体-抗体-待测抗原-抗体-温度敏感型纳米发光微粒免疫复合物；经清洗分离出免疫复合物后，加入已预热到最低临界溶解温度的激发物，检测前加热免疫复合物温度至最低临界溶解温度，温度敏感型纳米发光微粒中的氢键减弱，凝胶崩溃，发光物暴露，产生强烈的发光强度，用化学发光检测仪检测发光强度从而计算得到待测抗原的浓度；其中，所述的温度敏感型纳米发光微粒为表面同时带有羧基和两亲性的异丙基酰胺基，且粒径为50-200纳米的内部包裹发光物质的由异丙基丙烯酰胺以及甲基丙烯酸或丙烯酸经共价交联聚合后形成的水凝胶微粒。

2.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析法，其特征在于所述的温度敏感型纳米发光微粒通过以下方法制备得到：采用乳液聚合的方法制备异丙基丙烯酰胺和甲基丙烯酸的共聚纳米粒子P（NIPAm-co-MAA）；在超声和搅拌同时作用的条件下将发光物质逐滴加入到分散有共聚纳米粒子P（NIPAm-co-MAA）的体系中，使发光物质充分溶胀进入共聚纳米粒子P（NIPAm-co-MAA）中，得到 P（NIPAm-co-MAA）/吖啶酯复合纳米粒子即为温度敏感型纳米发光微粒。

3.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析法，其特征在于所述的发光物质为可以和激发液或者底物作用产生化学发光的物质。

4.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析法，其特征在于所述的发光物质选自 N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米、吖啶酯、吖啶磺酰胺、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶中的任意一种。

5.根据权利要求3所述的化学发光免疫分析法，其特征在于所述的发光物质选自吖啶酯时，所述的最低临界溶解温度为40℃，所述的激发物选自含有0.5wt%过氧化氢溶液的0.2M的硝酸溶液和含有1 wt %Tween-20的0.5M氢氧化钠溶液。

6.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析法，其特征在于所述的固相载体选自磁性微粒、酶标板。

7.根据权利要求1所述的化学发光免疫分析法，其特征在于共价偶联到温度敏感型纳米发光微粒羧基上的抗体和直接或者间接包被到固相载体上的抗体为针对同一待检抗原的配对的单克隆抗体。

8.权利要求1-7中任一项所述的基于温度敏感型纳米发光微粒标记放大的化学发光免疫分析法在制备化学发光免疫检测试剂盒中的应用。

9.一种化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于所述的试剂盒为检测肌钙蛋白I的化学发光免疫检测试剂盒；其中包含表面共价偶联了肌钙蛋白I单克隆抗体1的温度敏感型纳米发光微粒，链亲和素-生物素体系间接包被另一株肌钙蛋白I单克隆抗体2的致敏磁性微粒，激发液1：含有0.5 wt %过氧化氢溶液的0.2M的硝酸溶液，激发液2：含有1 wt %Tween-20的0.5M氢氧化钠溶液；以及化学发光激发液系统；所述的温度敏感型纳米发光微粒为表面同时带有羧基和两亲性的异丙基酰胺基，且粒径为50-200纳米的内部包裹发光物质的由异丙基丙烯酰胺以及甲基丙烯酸或丙烯酸经共价交联聚合后形成的水凝胶微粒。