[发明专利]3,7-二羟基卓酚酮高产菌株及其发酵培养方法

权利要求书

1.一株3,7-二羟基卓酚酮高产基因工程菌株，天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor）M1152/pCXF1，保藏编号为CGMCC No. 13914；该菌株含有碱基序列如SEQ IDNO.1所示的3,7-二羟基卓酚酮的生物合成基因簇。

2.一株3,7-二羟基卓酚酮高产基因工程菌株，天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor）M1154/pCXF1，保藏编号为CGMCC No. 13916 ；该菌株含有碱基序列如SEQ IDNO.1所示的3,7-二羟基卓酚酮的生物合成基因簇。

3.一种如权利要求1或2所述的菌株在生产3,7-二羟基卓酚酮中的用途。

4.一种如权利要求1或2所述的菌株的发酵培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1、MS培养基于28～30℃培养4～6天收集链霉菌孢子；

S2、收集的孢子涂布R3培养基于28～30℃培养5～6天发酵积累3,7-二羟基卓酚酮；

R3培养基配方如下：

葡萄糖 10 g，酵母提取物 5 g，酪蛋白氨基酸 0.1 g，L-脯氨酸 3 g，MgCl₂•6H₂O 10g，CaCl₂•2H₂O 4 g，K₂SO₄ 0.25 g，KH₂PO₄ 0.05 g，TES 5.6 g，微量元素溶液 2 ml，去离子水定容至1,000 ml，pH 7.2；

微量元素溶液（/L）包括：

ZnCl₂ 40 mg

FeCl₃•6H₂O 200 mg

CuCl₂•2H₂O 10 mg

MnCl₂•4H₂O 10 mg

Na₂B₄O₇•10H₂O 10 mg

(NH₄)₆Mo₇O₂₄•4H₂O 10 mg。

5.如权利要求4所述的菌株的发酵培养方法，其特征在于，所述方法还包括3,7-二羟基卓酚酮的纯化步骤，如下：

S3、将步骤S2中的R3发酵培养物利用乙酸乙酯进行浸提；

S4、所获得的发酵产物萃取物，通过CHP20P大孔树脂分离纯化，用甲醇水进行梯度洗脱，洗脱梯度为40%甲醇/水，于室温静置过夜即可观察到大量3,7-二羟基卓酚酮结晶析出。

6.如权利要求5所述的菌株的发酵培养方法，其特征在于，所述方法还包括纯化后进行液相检测的步骤；所用分析用液相色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18，检测仪器为Agilent1260 Infinity system，流动相为：A相为添加1‰三氟乙酸的水相，B相为乙腈；洗脱条件为：0 min，5% B；15 min，40% B；25～30 min，100% B；31～38 min，5% B；流动相比例按体积比计算。