[发明专利]一种能同时检测对乙酰氨基酚及其8种血浆代谢产物的方法

权利要求书

1.一种能同时检测对乙酰氨基酚及其8种血浆代谢产物的方法，所述8种血浆代谢产物为：4-硫酸-对乙酰氨基酚M1、葡萄醛酸化对乙酰氨基酚M2、3-羟基-对乙酰氨基酚M3、3-甲氧基-对乙酰氨基酚M3-3、对乙酰氨基酚谷胱甘肽二钠盐M4、3-半胱氨酰-对乙酰氨基酚M5、硫甲基3-嗪-对乙酰氨基酚M5-1、3-N-乙酰-半胱氨硫酰-对乙酰氨基酚M5-2；

该方法包括以下步骤：

(1)内标物对照品溶液的配置

配置含有浓度为90～110ng/mL的木蝴蝶苷OA和浓度为9～11μg/mL的非那西汀PNT的对照品溶液，-18～-22℃放置备用，即得内标物对照品溶液；

(2)供试品溶液的配置

取解冻后的大鼠血浆样品45～55μL，加入所述内标物对照品溶液9～11μL和蛋白沉淀剂135～165μL，搅拌、混合均匀，作为供试品溶液；

(3)检测条件

液相色谱分离条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含有体积浓度0.09～0.11％HCOOH的体积比为95：5的水-乙腈溶液为流动相A、以含有体积浓度0.1％HCOOH的乙腈为流动相B进行洗脱，流速0.2～0.4mL/min，柱温22～28℃，自动进样器温度：3～5℃，进样量为4～6μL；

质谱检测条件：采用ESI离子源，选择质谱多反应监测MRM工作方式进行二级质谱分析，以非那西汀PNT为内标物，在正离子检测方式下检测对乙酰氨基酚APAP、3-甲氧基-对乙酰氨基酚M3-3、3-羟基-对乙酰氨基酚M3、对乙酰氨基酚谷胱甘肽二钠盐M4和硫甲基3-嗪-对乙酰氨基酚M5-1；以木蝴蝶苷OA为内标物，在负离子检测方式下检测4-硫酸-对乙酰氨基酚M1、葡萄醛酸化对乙酰氨基酚M2、3-半胱氨酰-对乙酰氨基酚M5和3-N-乙酰-半胱氨硫酰-对乙酰氨基酚M5-2；

(4)测定

取供试品溶液的上清液135～165μL，进样4～6μL，测定，即得；

所述步骤(3)中，所述液相色谱分离条件中，所述流动相按照如下程序进行洗脱：

时间，min	流速，mL/min	A：B的体积比	Curve
0	0.3	100:0	初始
3	0.3	40:60	6
4	0.3	40:60	6
6	0.3	100:0	1

。