[发明专利]一种改性壳聚糖的核酸靶向递送载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种改性壳聚糖的核酸靶向递送载体及其制备方法和应用，其特征是以短肽缬氨酸-丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸(Val-Ala-Pro-Gly,VAPG)作为特异性识别短肽，载体具体为三甲基化壳聚糖-g-聚乙二醇-VAPG，其结构式为：

2.如权利要求1所述的载体，其特征是壳聚糖的重均分子量为1～50kDa；壳聚糖脱乙酰度大于90％。

3.如权利要求1所述的载体，其特征是三甲基化壳聚糖的甲基化度为20～60％。

4.如权利要求1所述的载体，其特征是聚乙二醇的双端的活性基团分别为琥珀酰亚胺乙酸酯基团和邻二硫吡啶基团；聚乙二醇的数均分子量为1～5kDa；载体中聚乙二醇的接枝率为10～30％。

5.权利要求1所述的基于改性壳聚糖的核酸靶向递送载体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)制备三甲基化壳聚糖-g-聚乙二醇-邻二硫吡啶：琥珀酰亚胺乙酸酯-聚乙二醇-邻二硫吡啶与三甲基壳聚糖反应，其质量比为1～5:1，三甲基化壳聚糖的浓度为5～10mg/mL，去离子水作为溶剂，室温下反应2～10h，产物使用去离子水透析，最后冻干得到三甲基化壳聚糖-g-聚乙二醇-邻二硫吡啶；

(2)制备三甲基化壳聚糖-g-聚乙二醇-VAPG：三甲基化壳聚糖-g-聚乙二醇-邻二硫吡啶与缬氨酸-丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸-半胱氨酸(Val-Ala-Pro-Gly-Cys,VAPG-Cys)短肽的质量比为5～20:1，去离子水为溶剂，室温反应2～8h，未参加反应的短肽通过透析除去，通过冻干的方法制得三甲基化壳聚糖-g-聚乙二醇-VAPG。

6.如权利要求1所述的基于改性壳聚糖的核酸靶向递送载体的应用，其特征是所述的核酸为microRNAs，具体为microRNA-145的双链模拟物，载体与microRNA-145复合得到纳米粒子，可靶向血管平滑肌细胞，调节血管平滑肌细胞的表型。

7.如权利要求6所述的应用，其特征是包括步骤：将制备的载体溶解于焦碳酸二乙酯处理过的水中，与microRNA-145溶液根据载体中氮原子和microRNA-145中磷原子的N/P摩尔数比例为12～20进行混合，室温静置10～30min。

8.如权利要求6所述的应用，其特征是所述的纳米粒子的动态光散射测试的粒径为50～200nm，ζ电位为2～30mV。