[发明专利]用于检测肺炎支原体的引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及一种用于检测肺炎支原体的引物组。所述引物组包括所述引物组包括针对肺炎支原体基因组的特异性引物对和探针，及针对内标质粒的引物对和探针。本发明还涉及一种用于检测肺炎支原体的试剂盒。所述试剂盒包括PCR反应液，所述PCR反应液两种PCR反应液，其中，一种PCR反应液为包括针对肺炎支原体基因组的特异性引物对和探针，及针对内标质粒的引物对和探针的第一PCR反应液，另一种PCR反应液为包括热启动酶和UNG酶的第二PCR反应液。本发明还涉及一种利用试剂盒检测肺炎支原体的方法。本发明提供的试剂盒及其检测方法具有操作简单、检测时间短、检测敏感性高等优点，特别适合在临床检验工作中普及应用。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种用于检测肺炎支原体的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)，旧称原发性非典型肺炎，由肺炎支原体(mycoplasma pneumonia，MP)感染引起。支原体是一种介于病毒与细菌之间，可自由通过细菌滤器的病原微生物，其构造简单，无细胞壁。目前发现3种支原体确定对人体致病，肺炎支原体为其中的一种。

MP是呼吸道感染的重要病原体，也逐渐成为儿童社区获得性肺炎的首要病原体。MPP的病理特征为间质性肺炎或毛细支气管炎改变，临床表现以顽固性剧烈咳嗽为特征。全年都有散发感染，秋末和冬初为发病高峰季节，流行周期约为4年。MP的感染还可造成肺外其他系统损害。据Vervloet LA报道，MP脑炎为MPP神经系统并发症中最常见的，其病死率高达10％，约25％留有后遗症。MP感染还可损害皮肤黏膜，泌尿系统和血液系统。此外，MP还可引起心血管系统、消化系统、关节肌肉等组织系统的非特异性发病症状。

MP的实验室诊断方法包括以下三类：第一是MP的分离培养，此为MP诊断的金标准，但培养技术要求苛刻，耗时长，大约为3-4周，灵敏度低，限制了其在早期诊断上的应用。第二类为血清特异性抗体检测，国际上公认的诊断标准为：急性期及恢复期的双份血清标本中，肺炎支原体特异性抗体滴度呈4倍或4倍以上增高或减低时，均可确诊为肺炎支原体感染。目前国内常用的为明胶颗粒凝集试验(PA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。但由于采集双份血清的可操作性低，血清学方法不适应于早期诊断。第三类为分子生物学方法。国内已被批准适用于临床的有RNA恒温扩增法，环介导的等温扩增法以及PCR荧光法。由于PCR荧光技术成熟，灵敏度高且特异性强，其临床应用最为广泛。

综上所述，本发明提供一种PCR荧光法检测肺炎支原体的引物组、试剂盒及方法。

发明内容

本发明的目的是设计针对肺炎支原体基因组的特异性引物对和探针，及针对内标质粒的引物对和探针，并同时针对肺炎支原体基因组上种特异目的片段和内标质粒进行双重荧光PCR扩增，以是否得到待检检样本的特异性扩增片段来判断是否感染肺炎支原体。

本发明提供一种用于检测肺炎支原体的引物组，所述引物组包括针对肺炎支原体基因组的特异性引物对和探针，及针对内标质粒的引物对和探针，其中：

所述针对肺炎支原体基因组的特异性引物对和探针的序列为：

特异性上游引物：

5’-ATTATTGGGCTCGCGAAACG-3’；

特异性下游引物：

5’-GGCTCGACAGCTTATACGAC-3’；

特异性探针：

5’-FAM-AGGCACTACCAATCGCGGCTTG-TAMRA-3’；

所述针对内标质粒的引物对和探针的序列为：

内标质粒上游引物：

5’-GGCATGTGGAGGAAGGTGGT-3’；