[发明专利]一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法

权利要求书

1.一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法，其特征在于，该方法具体步骤如下：

S1、取人体胚胎干细胞接种在BG02培养基上；

S2、培养过程中每天更换培养液，细胞培养至汇合状态后，消化后接种于新的饲养层细胞上，传代比例1:5-6；

S3、取生长良好的胚胎干细胞，制备单细胞悬液，将细胞悬液接种至六孔培养板中，六孔培养板中加入DMEM/F12培养液，培养3-4d对胚胎干细胞进行预诱导；

S4、将S3中预诱导结束的细胞PBS反复吹打，离心沉淀后加入胰蛋白酶消化，之后3-4×10⁷/L的细胞密度接种至0.9％甲基纤维素的半固体培养基中，每天更换培养液，细胞培养至汇合状态后，37℃条件下加入2-3mg/ml胶原酶Ⅳ进行消化传代，接种于新的饲养层细胞上，传代比例1:5，得到造血干细胞。

2.根据权利要求1所述的一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法，其特征在于：S1中所述培养基成分为：DMEM/F12培养基中加入0.5％N2，0.5％B27，20-30ng/ml bFGF和2-5ng/ml TGFβ。

3.根据权利要求1所述的一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法，其特征在于：所述S2中37℃条件下加入1mg/ml Tryp LE细胞消化酶进行消化传代。

4.根据权利要求1所述的一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法，其特征在于：S3中所述DMEM/F12培养液中加入0.1mol/L的地塞米松、50μg/mL链霉素和50μg/mL青霉素。

5.根据权利要求1所述的一种人工诱导多能干细胞分化为造血干细胞的方法，其特征在于：所述半固体培养基中加入15％FBS、30-40ng/mL SCF、1000-1200U/mL IL-3、10-15ng/mL IL-6。