[发明专利]一种针对胰腺癌的Car‑T细胞制备方法

权利要求书

1.一种针对胰腺癌的Car-T细胞制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

S1、采集患者外周血，提取外周血单个核细胞；

S2、将S1中得到的外周血单个核细胞用PBS洗涤，弃去上清液，取细胞沉淀中加入GT551重悬；

S3、将S2中得到的外周血单个核细胞以1x10⁶个/孔接种于24孔板中，于每孔中加入培养液和60IU/mL IL-2，培养24-36h，之后每孔板中加入20-40μL PersonGen^TM生物膜；

S4、每隔16-18h将S3中培养的细胞分孔一次，每孔补充培养液1-2mL，每隔36-48h补充PersonGenTM生物膜10-15μL，持续培养16-18d；

S5、将慢病毒对S4中的T细胞进行转染并扩增培养，获得CAR-T细胞。

2.根据权利要求3所述的一种针对胰腺癌的Car-T细胞制备方法，其特征在于：所述S1中的具体步骤为，采集患者外周富集血，滤除白细胞后缓慢移入装有淋巴细胞分离液的离心管中，用密度梯度离心法离心，吸取白膜层，得到外周血单个核细胞。

3.根据权利要求3所述的一种针对胰腺癌的Car-T细胞制备方法，其特征在于：S2中所述培养液成分为RPMI1640中加入10％FBS。

4.根据权利要求3所述的一种针对胰腺癌的Car-T细胞制备方法，其特征在于：S2中重悬后调整细胞浓度为2-2.5x10⁶。