[发明专利]一种同时测定烟草及烟草制品中12种生物碱的方法

说明书

技术领域

本发明属于理化分析技术领域，具体涉及一种同时测定烟草及烟草制品中12种生物碱的方法。

背景技术

生物碱是指一类存在于生物体内的含有氮杂环的有机化合物（蛋白质、钛类、氨基酸、氨、氨基糖、核苷酸、核酸除外），一般具有碱性并表现出生理活性。生物碱在烟草及其制品中具有特殊的地位，它不仅是烟草重要的品质因素，而且规定了烟草作为一种商品的特质。烟碱占烟草总生物碱的比例一般在92%以上，人们吸食烟草很大程度上是为了获取烟碱，所以是烟草中最重要的生物碱，它的存在赋予烟草及其制品以独特的魅力。除烟碱外，烟草中还含有其他次要生物碱，在烟草中含量较多、人们研究较多的生物碱主要有降烟碱、新烟草碱、假木贼碱、麦斯明等，这些次要生物碱也具有一定的生物活性，且是烟草及烟草制品中重要致癌物——烟草特有亚硝胺（TSNAs）的直接前体物质。此外，烟草中烟碱之外的次要生物碱研究还是判定电子烟等新型烟草制品中烟碱来源的重要特征性指标，这对电子烟等产品的管制有重要的理论和现实意义。

目前，测定烟草及烟草制品中生物碱的方法主要有气相色谱法（GC-FID/NPD/NCD）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS）高效液相色谱法（HPLC-UVD）、毛细管电泳法（CZE-UVD）等。但是，这些研究的次要生物碱主要集中在降烟碱、新烟草碱、假木贼碱、麦斯明等，而对其他次要生物碱的研究较少。例如，当前文献报道测定烟草中生物碱数量最多为8种，使用的是GC-NCD方法（Anal. Methods. 2012;4(7):2095-2100.）和LC-MS/MS方法（J. Chromatogr. Sci. 2015;53(10):1730-1736.），但是GC-NCD方法选择性不是很好，容易出现假阳性结果，而LC-MS/MS对部分目标物的检出限偏高，且分离效果不理想。Lisko等使用GC-MS/MS分析烟草中的生物碱（降烟碱、新烟碱、麦斯明、假木贼碱、2,3’-联吡啶），但目标物仅有5个（Anal. Chem. 2013;85(6):3380-3384.）。现行国内行业标准为5种生物碱（烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明、假木贼碱），CPRESTA推荐方法为2种生物碱（降烟碱、假木贼碱），并都使用GC-MS作为仪器分析方法，所以，气相色谱-质谱联用法由于其强大的分离能力及定性定量能力，是生物碱分析最常用的仪器分析方法，所以综合考虑到仪器普适性、选择性及灵敏度，最终选择NaOH水溶液+有机溶剂萃取的前处理方法，选择GC-MS作为分析仪器。

所以，为了实现更高通量的次要生物碱分析要求，我们根据文献调研，对次要生物碱指标进行扩展，最终确定了12种生物碱作为研究对象，并首次建立了GC-MS同时测定烟草及烟草制品中12种烟草生物碱的方法，具体包括烟碱、N-甲基假木贼碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、β-二烯烟碱、新烟草碱、2,3’-联吡啶、β-二烯降烟碱、可替宁、哈尔碱、烟台林等。

发明内容

本发明的目的正是基于上述技术不足，建立了一种同时测定烟草及烟草制品中12种生物碱的GC-MS高通量检测方法。本方法经过一次样品前处理过程即可同时测定烟草及烟草制品中的12种生物碱，具有操作简便、通量高、灵敏度高、回收率及重复性好等优点。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种同时测定烟草及烟草制品中12种生物碱的方法，所述12种生物碱分别为：烟碱、N-甲基假木贼碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、β-二烯烟碱、新烟草碱、2,3’-联吡啶、β-二烯降烟碱、可替宁、哈尔碱、烟台林，使用5%的氢氧化钠溶液先将目标样品中的生物碱游离出来，再用二氯甲烷/甲醇混合溶液(V_二氯甲烷/V_甲醇=4:1)进行液液萃取，以气相色谱-质谱联用法进行测定，内标法定量，具体包括以下步骤：

1）标准工作溶液的制备

分别制备具有5级浓度梯度的烟碱标准工作溶液，具有6级浓度梯度的降烟碱标准工作溶液及具有12级浓度梯度的其他10种次要生物碱标准工作溶液，其中，烟碱的定量采用喹啉作为内标，降烟碱的定量采用降烟碱-2,4,5,6-d₄作为内标，其它次要生物碱的定量采用2,2’-联吡啶-d₈作为内标；

2）样品前处理