[发明专利]迷你蝴蝶兰脱毒苗的组织培养方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及迷你蝴蝶兰脱毒苗的组织培养方法。本发明采用如下技术方案，迷你蝴蝶兰脱毒苗的组织培养方法包括如下步骤：选取迷你蝴蝶兰无菌试管苗进行热处理，从热处理后的无菌试管苗上取茎尖进行初代培养丛生芽，在初代培养的基础上进行继代培养，将成活的丛生芽进行病毒检测，挑选出病毒阴性丛生芽进行继代培养，最后进行生根培养。本发明采用组织培养技术进行苗木繁育，可以大大加快迷你蝴蝶兰的繁育速度。苗木质量高，由此提高观赏性：采用组织培养技术可以脱除迷你蝴蝶兰的主要病毒，消除了病毒的危害状，提高了迷你蝴蝶兰的观赏性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及迷你蝴蝶兰脱毒苗的组织培养方法。

背景技术

迷你蝴蝶兰又称小花蝴蝶兰，是蝴蝶兰Phalaenopsis aphrodita Rchb.F.的变种，通常指的是高度在20-25cm，可放置于2寸盆器中的蝴蝶兰。由于其体型小，方便包装，在国外经常被用作精致的礼品。由于迷你蝴蝶兰的栽培周期短，自组培瓶取出至可催梗阶段只需7-9个月，资金回收快，因此成为兰花产业入门者的首选。

尽管通过有性繁殖的种子苗几乎不携带病毒，且具有植株生长速度快等优势，但是由于其植株高低不齐且花色不一，因此商品性状较差，生产数量逐年大幅度降低。而通过组织培养技术(无性繁殖)生产的分生苗，因其植株和花色高度一致，逐渐替代种子苗，目前已占据市场份额的90％以上。但长期的无性繁殖必然会导致病毒的积累，致使品种日益退化，品质下降。兰花病毒一直是严重危害蝴蝶兰品质的一类重要病害，其寄主范围广泛，易传染，防治困难。目前世界上已经报道的兰花病毒有25种，其中以建兰花叶病毒(Cymbidiummosaic virus，CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum Ring Spot Virus，ORSV)发生最为普遍，危害也最严重。这两种病毒能使蝴蝶兰叶片形成褪绿条纹、凹陷灰白斑或坏死环斑，导致植株生长不良，花少、花期缩短，并且经常复合感染，危害加剧，使蝴蝶兰的观赏价值和经济价值大幅度下降。为避免蝴蝶兰病毒大规模发生，在亲本分生繁殖之前必须经过病毒检测，蝴蝶兰病毒也是苗木出口检疫的必检对象。为了提高蝴蝶兰瓶苗的竞争力，清除ORSV和CymMV以及更多的病毒，培育优质脱毒苗是蝴蝶兰生产发展的必然趋势。

发明内容

为弥补现有技术的不足，本发明提供一种迷你蝴蝶兰脱毒苗的组织培养方法，该方法获得苗木质量高，脱出迷你蝴蝶兰的主要病毒，消除了病毒的危害状，提高了迷你蝴蝶兰的观赏性。

本发明采用如下技术方案，迷你蝴蝶兰脱毒苗的组织培养方法包括如下步骤：选取迷你蝴蝶兰无菌试管苗进行热处理，从热处理后的无菌试管苗上取茎尖进行初代培养丛生芽，在初代培养的基础上进行继代培养，将成活的丛生芽进行病毒检测，挑选出病毒阴性丛生芽进行继代培养，最后进行生根培养。其中，初代培养基中6-BA浓度为3.0-4.0mg/L、NAA浓度为0.3-0.5mg/L、香蕉泥为25-35g/L、活性炭为2-4g/L；继代培养基中，6-BA浓度为7.0-9.0mg/L、NAA浓度为0.2-0.4mg/L、香蕉泥为25-35g/L、活性炭为2-4g/L；生根培养基中6-BA浓度为3.5-4.5mg/L、NAA浓度为0.7-0.9mg/L、香蕉泥为25-35g/L、活性炭为2-4g/L。

优选的，所取迷你蝴蝶兰茎尖大小为0.5-1.0mm。

优选的，初代培养基中还加入浓度为1-5/L的碳酸氢钠和浓度为20-40mg/L的病毒唑。

优选的，所述初代培养的条件为：首先进行两周暗培养，然后于温度25℃，光照强度2000lx，光照周期14h/d，培养四周。

由于植物病毒是通过输导组织在植物体内进行传播的，而植物的分生组织由于分裂很快且还没有形成输导组织，因此分生组织内不存在病毒，本发明采取抑制和钝化病毒的热处理和化学试剂处理外植体，经过不同阶段的培养，通过分子水平上的病毒检测技术，最终可以获得脱除主要病毒的迷你蝴蝶兰苗木，使迷你蝴蝶兰在无主要病毒的情况下进行快速繁殖。