[发明专利]一种鉴定企鹅性别的方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201710731156.0 | 申请日： | 2017-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN107354219B | 公开（公告）日： | 2020-12-18 |
| 发明（设计）人： | 董贵信;程松;张德录;张学礼 | 申请（专利权）人： | 广州长隆集团有限公司香江野生动物世界分公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6879 | 分类号： | C12Q1/6879;C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 广东广信君达律师事务所 44329 | 代理人： | 杨晓松 |
| 地址： | 511400 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴定 企鹅 性别 方法 试剂盒 | ||
1.一种鉴定企鹅性别的方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)采用Blood DNA Mini Kit提取待测企鹅的血液的DNA；
(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，使用引物Sex F和引物Sex R进行PCR扩增，得到扩增产物；
(3)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判断企鹅性别，其中，电泳条带为660bp一条带为雄性企鹅，电泳条带为660bp和750bp两条带为雌性企鹅；
步骤(2)中所述的引物Sex F和引物Sex R的核苷酸序列如下所示：
Sex F：5′-GTTACTGATTCGTCTACGAGA-3′；
Sex R：5′-ATTGAAATGATCCAGTGCTTG-3′；
步骤(2)中所述的PCR扩增的反应程序为：95℃4min；94℃30s，45℃30s，72℃50s，35个循环；72℃，10min。
2.根据权利要求1所述的鉴定企鹅性别的方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的企鹅的血液的用量为10μL。
3.根据权利要求1所述的鉴定企鹅性别的方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的PCR扩增的体系为25μL体系，具体如下：
4.权利要求1～3任一项所述的鉴定企鹅性别的方法，其特征在于还包含如下步骤：
(4)如果步骤(3)电泳检测无条带，以步骤(1)提取的DNA为模板，使用引物P2和引物P8进行PCR扩增，得到扩增产物；
(5)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果判断企鹅性别，其中，电泳条带为380bp一条带为雄性企鹅，电泳条带为370bp和380bp两条带为雌性企鹅；或直接将扩增产物进行测序，根据测序结果，鉴定企鹅的性别；
步骤(4)中所述的引物P2和引物P8的核苷酸序列分别如下所示：
引物P2：5′-TCTGCATCGCTAAATCCTTT-3′；
引物P8：5′-CTCCCAAGGATGCAACTG-3′。
5.根据权利要求4所述的鉴定企鹅性别的方法，其特征在于：
步骤(4)中所述的PCR扩增的体系为25μL体系，具体如下：
6.根据权利要求4所述的鉴定企鹅性别的方法，其特征在于：
步骤(4)中所述的PCR扩增的反应程序为：95℃4min；94℃30s，56℃30s，72℃25s，35个循环；72℃，10min。
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