[发明专利]一种硫堇伊红染色液及制备方法和应用

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种硫堇和伊红染色液及其制备方法，以及染色方法，硫堇染色液利用酸解的方法可打断DNA分子链中的嘌呤‑脱氧核糖链，即去嘌呤作用，然后DNA部分区域发生重排，暴漏出醛基，硫堇能与细胞中的醛基反应形成一种醌型化合物，使细胞核DNA染成蓝色；伊红是一种化学合成的酸性染料，在醇中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使细胞浆、细胞质和细胞外基质染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。标本背景清晰，层析分明，染色效果好，色彩饱和，易于数字化图像分析、医生诊断。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种病理学诊断中组织学和细胞学标本染色的特殊染色试剂，具体涉及一种硫堇伊红染色液及其制备方法和应用。

背景技术

硫堇伊红染色法，区别于常用的染色方法，是一种特殊染色方法，可用于组织学、细胞学染色。

硫堇染色液利用酸解的方法可打断DNA分子链中的嘌呤-脱氧核糖链，即去嘌呤，然后DNA部分区域发生重排，暴漏出醛基，硫堇能与细胞中的醛基反应形成一种醌型化合物，使细胞核DNA染成蓝色。硫堇分子式C14H13N3O2S，结构式如下：

伊红是一种化学合成的酸性染料，分水溶性和醇溶性两种，主要使细胞质和细胞间质着红色，在醇中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使细胞浆、细胞质和细胞外基质、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。醇溶性伊红结构式如下：

。

发明内容

本发明的目的是提供一种硫堇伊红染色液的制备及染色方法，可用于人体组织学和细胞学的特殊染色。

本发明提供了所述硫堇伊红染色液及制备方法：

本发明的硫堇伊红染色液，包括硫堇染色液和伊红染色液；

所述的硫堇染色液，每1000ml所述硫堇染色液中包括如下组分：

硫堇（硫堇劳氏紫粉末）0.5-3.0g；染料助剂0.5-2g；醇20-80ml；强酸10-15ml；余量为水；所述的伊红染色液，每1000ml所述伊红染色液中包括如下组分：

曙红3-8g；弱酸30-50ml；水50ml；乙醇900-920ml；

所述染料助剂为亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠中的至少一种；

所述醇为乙醇、甲醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇中的一种或多种混合物；

所述乙醇为95%乙醇或无水乙醇

所述强酸为盐酸、硫酸或硝酸中的至少一种

所述弱酸为乙酸、水杨酸、柠檬酸、次氯酸、亚硫酸、偏硅酸的一种或多种的混合物；

所述伊红为醇溶性伊红；

所述水为蒸馏水、去离子水、纯化水及体外诊断试剂用纯化水；

本发明的一种硫堇伊红染色液的制备方法，包括以下步骤：

1）硫堇染色液的配制：

a) 将水加热至50-70℃，加入硫堇，搅拌1-2小时，冷却室温过滤；

b) 加入染料助剂和醇，搅拌均匀；

c）使用前，加入强酸，搅拌50-90min，搅拌温度控制在20-30℃，搅拌结束后直接用于染色；

2）伊红染色液的配制：

a）将伊红加入水中，加热搅拌至完全溶解，制备伊红原液；