[发明专利]一种皮肤成纤维细胞培养的选择性培养基及其制备方法

说明书

一种皮肤成纤维细胞培养的选择性培养基，包括基础培养基、胎牛血清、人血清白蛋白、牛脑垂体提取物、胰岛素、维生素C、生物素、胰岛素样生长因子和表皮生长因子，并且按照1ml：0.0125ml‑0.05ml：0.005ml‑0.025ml：80μg‑423μg：7μg‑18μg：22μg‑60μg：37μg‑214μg：1μg‑20μg：0.1μg‑1μg的比例混合；所述基础培养包括DMEM培养基和F12培养基。本发明的优点在于对成纤维细胞具有选择性，提高成纤维细胞的纯度，避免杂细胞污染，有效缩短细胞传代数，细胞增殖速度快。本发明的选择性培养基还能够降低血清使用量，节约成本。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及一种皮肤成纤维细胞培养的选择性培养基及其制备方法。

背景技术

皮肤的成纤维细胞广泛分布于真皮组织中，成纤维细胞通过分泌多种物质构成细胞外基质，从而形成结缔组织，对机体发挥结构性功能。成纤维细胞在人的一生中发挥重要作用，如在胚胎期指导皮肤形成，器官成熟后参与皮肤稳态的维持，促进损伤部位结构与功能的修复等。因此，体外培养自体皮肤成纤维细胞在组织工程，美容，医疗等领域具有很广泛的应用。

目前，体外培养成纤维细胞方法中使用的培养基基本由基础培养基和20％胎牛血清配置而成，而此类培养基的具有以下缺点：

1、对成纤维细胞没有选择性，需要对原代组织进行各种复杂的操作获得较纯的真皮组织。如采用胰酶消化原代组织，从而分离表皮和真皮，再将真皮切碎后用胶原酶消化成单细胞，最后放入培养基中培养，该操作过程中酶会对细胞造成不可逆的损伤，使细胞得率低，同时还具有成本高、消化时间久，操作复杂等缺点。

2、由于没有成纤维细胞选择性，前3代往往很难获得纯化的成纤维细胞，需要多次传代才能获得高纯度的细胞，然而传代越多会使得细胞的原代活性越来越差，疗效显著降低，同时存在致瘤风险。另外，每次传代时使用胰酶消化也会对细胞造成严重的损伤。

3、传代操作时，为了保证细胞活力和增值速度无法大数量扩瓶培养，往往选择1瓶传3瓶或者更少，导致培养时间久，传代数多，细胞原代活性差。

4、胎牛血清价格昂贵，批次差异大，并且使用剂量限制大，降低动物血清对人体的安全隐患。

如申请号为201710018241.2的中国发明专利，公开了一种制备人皮肤成纤维细胞膜片的细胞培养基，包括：基础培养基：H-DMEM(High Glucose-Dulbecco minimumessential medium，高血糖-杜尔伯科极限必需培养基)或者DMEM-F12(Dulbecco minimumessential medium-Ham＇sF 12nutrient medium，杜尔伯科极限必需培养基-动物细胞培养基)；(2)添加组分：维生素C50-100μg/ml，EGF(Epidermal Growth Factor，表皮生长因子)3-20ng/ml，(3)血清5-15％。该培养基虽然血清用量较少，但是其不具有成纤维细胞选择性，培养基中的杂细胞对于成纤维细胞的生长有很大的影响。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有成纤维细胞选择性，对于血清依赖性小的选择性培养基。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

一种皮肤成纤维细胞培养的选择性培养基，包括基础培养基、胎牛血清、人血清白蛋白、牛脑垂体提取物、胰岛素、维生素C、生物素、胰岛素样生长因子和表皮生长因子，并且按照1ml：0.0125ml-0.05ml：0.005ml-0.025ml：80μg-423μg：7μg-18μg：22μg-60μg：37μg-214μg：1μg-20μg：0.1μg-1μg的比例混合；

所述基础培养包括DMEM培养基和F12培养基。