[发明专利]一种粗茎紫金牛组织培养和快速繁殖方法

说明书

本发明一种粗茎紫金牛组织培养和快速繁殖方法。本发明实现了粗茎紫金牛组织培养快速繁殖，为粗茎紫金牛组织培养技术开辟新道路。本发明的方法操作简单，易于实施，可一次性培育出大量的粗茎紫金牛种苗。本发明能够有效的缩短育苗时间，且本发明所用的培养基和试剂易配置，成本低，易大范围推广。

技术领域：

本发明属于植物繁殖领域，具体涉及一种粗茎紫金牛组织培养和快速繁殖方法。

背景技术：

粗茎紫金牛(Ardisia dasyrhizomatica C.Y.Wu et C.Chen)是紫金牛科紫金牛属常绿灌木，高约50厘米，茎粗壮，直立不分枝；叶片革质，聚生茎顶端，叶片大，紫红色；花紫红色、果鲜红色。该物种产于云南河口，分布在海拔约150米的林下，其标本仅见于昆明植物所标本馆，由中越考察队于1965年采集。因当地大面积开垦林地种植香蕉，其生境受到严重破坏，2013年在云南河口一带多次野外考察过程中，仅发现2处香蕉地边缘沟边有十多株，2016年11月再次考察时仅剩1处香蕉地边缘有5株。粗茎紫金牛生境受到严重破坏，野生数量稀少，具有重要的研究和保护意义。同时其株型低矮紧凑，叶片紫红色，花紫红色，具有很高的观赏价值和开发利用前景。

华南植物园于2013年开展了粗茎紫金牛迁地保育研究，几年的观察研究发现其在广州栽培能正常开花，但自然条件下难以结实，而扦插繁殖会使母株受损，且繁殖系数低。如何解决其繁殖技术问题，成为该物种保护和开发利用的关键。

发明内容：

本发明的目的是提供一种粗茎紫金牛组织培养和快速繁殖方法，繁殖系数高，培育时间短，只需有简单的植物组织培养设备即可进行，实现粗茎紫金牛种苗的组织培养和快速繁殖。

本发明的粗茎紫金牛组织培养和快速繁殖方法，包括以下步骤：

a、在生长季节剪取粗茎紫金牛幼嫩叶片作为外植体；

b、将外植体消毒，将消毒后的外植体的叶脉主脉两边的叶子各切掉一半，然后将余下的外植体切块，将切块接种于初代诱导培养基中培养获得丛生芽，所述的初代诱导培养基每升含有：0.5～1.5mg TDZ(噻苯隆)、0.2～0.5mg NAA(萘乙酸)、琼脂、蔗糖，余量为WPM培养基，每升初代诱导培养基是这样配制的：按上述组分及其含量，在少量WPM培养基加入TDZ、NAA、琼脂、蔗糖，然后再用WPM培养基定容至1L，调pH至5.2，混合均匀后，灭菌后即得初代诱导培养基；87～94天所述的切块叶脉开始膨大，继续接种90天在膨大的主脉、侧脉上开始有丛生芽冒出；

所述的初代诱导培养基中琼脂、蔗糖的量为常规量就可以，如琼脂6g/L，蔗糖20g/L，pH优选为5.2。

c、将萌发丛生芽的膨大的叶脉切割成带1～2个丛生芽的小块，接种于继代增殖培养基中培养获得继代培养苗，所述的继代增殖培养基每升含有：1.0～2.0mg 6-BA(6-苄基腺嘌呤)、0.1～0.5mg NAA、琼脂、蔗糖，余量为WPM培养基，每升继代增殖培养基是这样配制的：按上述组分及其含量，在少量WPM培养基加入6-BA、NAA、琼脂、蔗糖，然后再用WPM培养基定容至1L，调pH至5.2，混合均匀后，灭菌后即得继代增殖培养基；继代增殖培养周期为120d，增殖系数达2.1～4.0；

所述的继代增殖培养基中琼脂、蔗糖的量为常规量就可以，如琼脂6g/L，蔗糖20g/L，pH优选为5.2。

d、待继代培养苗长到3～4厘米时，将所述的继代培养苗从基部切开来，用含有NAA的溶液浸泡，然后扦插于由泥炭和珍珠岩组成的基质中，培养期间注意杀菌、保湿和遮阴，获得组培苗；30天左右开始生根，每株苗有根数3-5条，生根率可达92％，所述的基质由泥炭：珍珠岩按质量比2:1混合而成；

e、将组培苗移栽到移栽基质中进行移栽培养。