[发明专利]水貂源性成分的恒温荧光法检测引物组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.水貂的恒温检测引物组，包括外引物OF和外引物OB、内引物IF和内引物IB 、环引物和分子信标，其核苷酸序列分别如下所示：

外引物OF:5'-GATCTCATCCGACTCTCC-3'(SEQ ID NO. l) ；

外引物OB:5'-GGATAGAATAGCTAGTGTT-3'(SEQ ID NO. 2)；

内引物IF:5'-AGGGGTGAAAGGGGATTTTGTCATGAAACAGGATCCAATAAC-3'(SEQ ID NO. 3) ；

内引物IB:5'-TATCCTACTACTGGCTATGCACTACACCGCAGTATAATTGTCTG-3'(SEQ ID NO. 4) ；

环引物：5'-AATCAGATGGGATTCCAG-3'(SEQ ID NO. 5) ；

分子信标：GACCTGCTTGTGTTGGCTACTGAGGAGCGCAGGTC(SEQ ID NO.6)。

2.一种水貂的恒温检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1 所述的恒温检测引物组。

3.根据权利要求2所述的水貂的恒温检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括：

DNA聚合酶、恒温反应液、阳性对照和阴性对照。

4.根据权利要求3 所述的水貂的恒温检测试剂盒，其特征在于，恒温反应液由l0mM

dNTP、150mM MgSO₄水溶液组成，按体积比计，dNTP：MgSO₄水溶液＝ (7~9) : （2~4) 。

5.根据权利要求3所述的水貂的恒温检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为水貂的DNA或含目的基因的质粒，阴性对照为不含目的基因的反应混合液。

6.一种水貂的检测方法，其步骤是：

(1) 提取待检样品DNA；

(2) 恒温基因扩增反应：利用权利要求1 所述的恒温检测引物组对待检样品进行恒温扩增，扩增时将检测管放置在可提供恒温及荧光检测的仪器上，每30~60s采集一次荧光信号；

(3) 结果判断：根据有无“S”型扩增曲线判断阴阳性结果，有“S”型扩增曲线为阳性结果，反之为阴性结果。

7.根据权利要求6所述的水貂的检测方法，其特征在于，所述恒温基因扩增反应体系是内含分子信标的PM引物1.5μL，Bst大片断DNA聚合酶lμL，DNA模板2μL，恒温反应液12.5μL，不含目的基因的双蒸水补足25μL；

所述PM 引物配置方法是：内引物IF和IB配置成200μM，外引物OF和OB配置成l00μM ，环引物和分子信标配置成200μM，将外引物OF/OB：环引物/分子信标：内引物IF/IB：ddH₂O为1:2:4:6的比例配置成PM引物。