[发明专利]一种辣根过氧化物酶的固定化方法及其应用

权利要求书

1.一种固定化辣根过氧化物酶的制备方法，其特征在于：将辣根过氧化物酶通过物理吸附的固定化方法进入氨基化修饰的介孔二氧化硅纳米颗粒孔道内部；所述氨基化修饰后的介孔二氧化硅纳米颗粒的粒径为250-350nm，介孔孔径为7-8nm；具体制备包括以下步骤：

（1）将3.36mL氨水与75mL乙醇混合均匀，反应5min后将0.21mL甲醛、0.15g间苯二酚加入，反应7h后，逐滴加入0.65mL原硅酸四乙酯，反应结束后，将得到的材料用乙醇离心、清洗三遍，真空烘干整晚，将材料进行煅烧，得到介孔二氧化硅纳米颗粒；

（2）得到的介孔二氧化硅纳米颗粒为白色粉末，将得到的白色粉末，溶解在超纯水中，并加热至沸腾，反应2h，离心，并置于真空干燥箱中干燥；取已经活化好的介孔二氧化硅纳米颗粒0.2g，加入2mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，并置于20mL甲苯中，冷凝回流；反应结束后，将反应液离心，并用无水乙醇离心、清洗三次，得到了氨基化之后的介孔二氧化硅纳米颗粒；

（3）在10mM PBS缓冲液中加入2mg氨基化介孔二氧化硅纳米颗粒与10mL辣根过氧化物酶，室温搅拌24h，得到固定化的辣根过氧化物酶；

步骤（1）中煅烧的温度为550℃，煅烧6h。

2.根据权利要求1所述固定化辣根过氧化物酶的制备方法，其特征在于：步骤（2）中冷凝回流温度为80℃，时间为12h。

3.根据权利要求1所述固定化辣根过氧化物酶的制备方法，其特征在于：PBS缓冲液的pH为 7.4。

4.一种如权利要求1所述方法制得的固定化辣根过氧化物酶。

5.一种如权利要求1所述方法制备得到的固定化辣根过氧化物酶的应用，其特征在于：应用于苯酚类化合物的去除。