[发明专利]一种检测氯氰菊酯的时间分辨荧光试纸条及其应用

权利要求书

1.一种检测氯氰菊酯的时间分辨荧光试纸条，包括样品吸收垫、反应膜以及吸水垫，其特征在于所述反应膜位于中间，样品吸收垫与吸水垫分别搭接于反应膜左右两端；所述样品吸收垫上设有加样区和微球区，微球区上载有氯氰菊酯时间时间分辨荧光微球；所述反应膜上设有检测线(T线)和质控线(C线)，T线接上包被氯氰菊酯抗原(包被原)，C线包被抗兔抗体，所述氯氰菊酯抗原是氯氰菊酯半抗原-载体蛋白偶联物，所述氯氰菊酯半抗原的制备方法如下：

(1)将24.3g 3-(4-硝基苯氧基)苯甲醛溶于100ml无水甲醇中，室温搅拌溶解，加入碘0.5g，滴加11g TMSCN，滴加完毕，室温反应10h，蒸干溶剂，柱层析纯化，得到25.65g氰基醇目标物，收率95％；

(2)将步骤一中得到的氰基醇27g加入到100ml三氯甲烷中，室温搅拌溶解，加入Py8.5g，于室温下滴加含有22.6g二氯菊酰氯的30ml三氯甲烷溶液；滴加完毕，室温继续反应5h，蒸干溶剂，柱层析纯化，得到氰基酯目标物42.32g，收率92％；

(3)将步骤二所得的氰基酯化合物46g，加入到120ml无水甲醇中，室温溶解，倒入加氢釜中，加入Pd/C3g，加1个大气压，室温反应6h，过滤除去Pd/C，减压去溶剂，得到氨基目标物40.8g，收率95％；

(4)将步骤三所得氨基化合物43g加入到200ml三氯甲烷中，室温搅拌溶解；加入1g对甲基苯磺酸，加入琥珀酸酐12g，室温搅拌反应过夜；蒸干溶剂，柱层析纯化得到含羧基的半抗原目标物45.6g，收率86％。

2.如权利要求1所述的检测氯氰菊酯的时间分辨荧光试纸条，其特征在于所述氯氰菊酯半抗原的分子结构式为：

3.如权利要求1所述的检测氯氰菊酯的时间分辨荧光试纸条，其特征在于所述氯氰菊酯时间分辨荧光微球，包括检测微球和质控微球，检测微球为表面包被有氯氰菊酯单克隆抗体的荧光微球，质控微球为表面包被有兔抗标记蛋白的荧光微球。

4.如权利要求1所述的检测氯氰菊酯的时间分辨荧光试纸条，氯氰菊酯单克隆抗体是以氯氰菊酯半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述免疫原的制备方法如下：

将133mg BSA溶于5ml 0.01M PBS，搅拌溶解。氯氰菊酯半抗原与BSA比例可在1∶1～60∶1的范围内调整，本申请选择在加入53mg氯氰菊酯半抗原(与BSA摩尔比为50∶1)，加入EDC盐酸盐10mg，室温搅拌2h。移入透析袋中透析48h。

5.如权利要求1所述的检测氯氰菊酯的时间分辨荧光试纸条，所述包被原的制备方法如下：

将86mg OVA溶于5ml 0.01M PBS，搅拌溶解。氯氰菊酯半抗原与OVA比例可在1∶1～40∶1的范围内调整，本申请选择在加入42.4mg氯氰菊酯半抗原(与OVA摩尔比为40∶1)，加入EDC盐酸盐10mg，室温搅拌2h。移入透析袋中透析48h。

6.一种制备权利要求1-5任一项所述试纸条的方法，其包括步骤：

1)制备喷涂有氯氰菊酯单克隆抗体-时间分辨荧光标记物的样品吸收垫；

2)制备具有包被有氯氰菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有抗兔抗体的质控线的反应膜；

3)将1)和2)制备好的样品吸收垫、反应膜以及吸水垫组装成试纸条。

7.一种检测苹果、玉米、黄瓜、西红柿、菠菜、白菜等样品中氯氰菊酯残留的方法，其包括步骤：

1)样本前处理；

2)用权利要求1-6任一项所述的试纸条进行检测；

3)分析检测结果。