[发明专利]一种检测植物样品中抗生素及其代谢物含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物中抗生素及其代谢物残留的理化检测技术领域，更具体地，涉及一种检测植物样品中抗生素及其代谢物含量的方法。

背景技术

抗生素是具有抗菌和消炎的一类药物，被广泛应用于畜禽和水产养殖，而抗生素被动物吸收后进入体内并不能完全代谢，绝大部分以母体的形式随粪便尿液排出体外，导致抗生素一直持续进入环境中，造成一种环境中抗生素的假持久性。

进入环境中的抗生素会对植物造成生态毒害作用，植物的光合作用、生长速率等会产生抑制，量化植物体内抗生素及其代谢物的富集量一方面可明确植物食品的食用风险，另一方面还可作为植物修复技术的评估材料。

对于植物体内抗生素及其代谢物的一体化高效分析提取检测方法，目前报道较少，而前处理技术已成为准确检测分析植物中抗生素含量的关键步骤和难点。常规前处理过程包括提取、净化、分离、浓缩等过程，生物体内抗生素的提取方法包括凝胶渗透色谱法，固相萃取法、加速溶剂萃取、微波辅助溶剂萃取等方法，目前使用的这些主流方法都存在一定局限性，处理时间较长。

研究进展中有报道提取方法中采用液液萃取+固相萃取柱净化结合的提取净化方法，但是对实验操作者的熟练程度要求较高，重复性不稳定，处理时间仍然比较长。在净化处理过程中，使用比较多的是采用PSA作为净化剂，PSA具有一定的去除色素的能力，但是相对偏弱，净化后上机仍然存在大量色素和其他杂质，尤其是对一些植物样品，其净化效果存在局限性，对检测结果准确性影响较大。

与此同时，对于不同的待测抗生素，化合物性质的差异性，对样品的处理和检测也提出了不同的要求。开发一种快速、简便、高效、稳定的植物样品抗生素检测方法尤为迫切。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对植物样品抗生素及其代谢物的检测技术难题，提供一种检测植物样品中抗生素及其代谢物含量的方法，准确检测和评价植物样品中抗生素含量提供有力的技术基础。

本发明还有要解决的技术问题是提供所述方法的应用。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

提供一种检测植物样品中抗生素及其代谢物含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1.植物前处理：将植物样品洗净，干燥、粉碎过筛得植物样品粉末；

S2.提取：称取植物样品粉末，加入所述固相萃取剂和酸化乙腈，均质，离心收集提取液；

S3.净化：在步骤S2所得提取液中加入所述净化剂，涡旋震荡、离心得上清液，将上清液经氮气吹干浓缩，吹至近干时加入色谱醇甲醇定容；

S4.检测：采用超高效液相色谱-质谱联用仪测定方法进行检测；

所述检测条件为：超高压液相色谱系统（ExionLC AD）使用Venusil,2.1×100mm、3µm的C18 Plus色谱柱,运行温度为25℃；流动相为2‰ 甲酸水（A）和乙腈(B)，梯度洗脱顺序为：10%B，0 min，25%B，2 min，55%B，3 min，55%B，5 min，10%B，5.1 min，10%B，7 min ；每个样品进1μL样，流速为0.5mL/min；

质谱采用QTRAP 5500（AB Sciex，US），离子源为ESI源正离子模式，气帘气压为35 psi，离子源电压为5500V，干燥气温度为500℃，雾化器压力为50psi，干燥气压力为50psi；

步骤S1所述提取采用的提取剂是固相萃取剂和酸化乙腈的混合物；所述固相萃取剂为氯化钠、二水柠檬酸钠、柠檬酸二钠盐1.5水合物和无水硫酸镁的混合物；所述酸化乙腈是含有0.5～2% 乙酸的乙腈。

优选地，步骤S1所述过筛是过60目筛。

优选地，步骤S1所述干燥、粉碎是将植物用纯水洗净表面尘土，吸水纸擦干表面水分，进行冷冻干燥后粉碎。

进一步优选地，所述冷冻干燥是在-50℃左右温度条件下进行干燥处理的。干燥时间根据具体的植物样品量进行确定，一般为3～4天左右。

优选地，步骤S2所述均质是迅速涡旋1～5分钟使其完全均质。步骤S2结合快速的涡旋处理，相比传统提取中的长时间的振荡或超声提取，使得本发明方法的回收率更为显著提高，且更加快速。

优选地，步骤S3所述离心处理是在10000r/min的速度下离心5～10min。

优选地，所述方法还包括步骤S4，步骤S4是将步骤S3离心处理后离心管底部的植物残渣再次加入5mL酸化乙腈进行第二次提取，合并提取液，进一步提高回收率。