[发明专利]人源化基因改造动物模型的制备方法及应用

权利要求书

1.导入人TIGIT基因的非人动物或其子代的制备方法，其特征在于，导入人TIGIT基因、使得该人TIGIT基因在非人动物或其子代细胞中表达并且促进该细胞产生人源化的TIGIT蛋白，同时降低或消除了非人动物或其子代的体内动物来源的TIGIT基因的表达，其中，将动物来源的Tigit的第2号外显子部分序列替换为人TIGIT的第2号外显子部分序列，所述的人TIGIT的第2号外显子部分序列包含SEQ ID NO：38。

2.一种制备非人动物的方法，所述非人动物在其种系基因组中插入一段外源TIGIT基因，所述方法包括：

(a)构建含有人TIGIT基因的载体，通过基因工程方法利用所述含有人TIGIT基因的载体将人TIGIT基因导入非人动物的基因组，将动物来源的Tigit的第2号外显子部分序列替换为人TIGIT的第2号外显子部分序列，使得非人动物基因组中的动物来源的Tigit基因缺失或使得动物来源的Tigit基因不具有功能；并且

(b)在所述非人动物体内表达人源化TIGIT基因；

其中，所述的人TIGIT的第2号外显子部分序列包含SEQ ID NO：38。

3.一种制备基因改造的非人动物的方法，改造后的非人动物包含动物来源的Tigit基因的人源化序列，其中所述人源化序列包含在动物来源的Tigit基因座中，用人TIGIT胞外域编码序列取代动物来源的Tigit胞外域编码序列的部分，所述的人源化序列包含编码人TIGIT多肽的氨基酸的第2号外显子的部分序列，所述的编码人TIGIT多肽的氨基酸的第2号外显子的部分包含SEQ ID NO：38。

4.一种人源化动物模型构建的方法，其特征在于，所述动物模型基因组中包括TIGIT基因，TIGIT基因编码的蛋白包括胞外区、跨膜区以及胞内参与信号传导的区域，其中TIGIT基因编码的胞内参与信号传导的部分为动物来源，TIGIT基因编码的胞外区域包含人TIGIT基因的部分片段，同时该动物来源部分和人源部分通过序列拼接连接于动物模型内源的TIGIT启动子后；其中，TIGIT基因编码的跨膜区为动物来源，所述人TIGIT基因部分为编码人TIGIT多肽的氨基酸的第2号外显子的部分序列，所述编码人TIGIT多肽的氨基酸的第2号外显子的部分序列包含SEQ ID NO：38。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，其中，动物来源的Tigit包括动物来源Tigit基因的第1号外显子、第2号外显子的部分序列、第3号外显子及其后所有外显子的全部序列。

6.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，其中，动物来源的Tigit基因为啮齿类动物来源的Tigit基因。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述啮齿类动物为小鼠。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，其中，小鼠TIGIT的mRNA序列如SEQ ID NO：27所示。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，其中，小鼠TIGIT的蛋白序列如SEQ ID NO：28所示。

10.根据权利要求1-4和7-9任一所述的方法，其特征在于，其中，人TIGIT基因的人TIGIT mRNA序列如SEQ ID NO：29所示。

11.根据权利要求1-4和7-9任一所述的方法，其特征在于，其中，人TIGIT蛋白序列如SEQ ID NO：30所示。

12.根据权利要求1-4和7-9任一所述的方法，其特征在于，所述的非人动物或动物模型的基因组中包括嵌合TIGIT基因，所述嵌合TIGIT基因包括小鼠来源的TIGIT基因部分和人源的TIGIT基因部分，所述嵌合TIGIT基因mRNA序列如SEQ ID NO：33所示。