[发明专利]一种金钱松试管苗培育方法

权利要求书

1.一种金钱松试管苗培育方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)取材：取一年生金钱松实生苗2.0-3.0㎝带顶芽的嫩枝，剪去叶片后洗净并消毒得培养基苗；

2)纸桥液体培养：把圆形滤纸折成酒杯状塞进试管中，使滤纸开口的一端朝向试管的底部，倒入液体培养基达到试管内滤纸的二分之一，使滤纸封闭的一端露出所述液体培养基，将所述培养基苗在超净工作台上剥取长2mm、带1-2根腋芽的茎尖放置于试管内滤纸封闭的一端上，在试管口上塞上棉塞进行光照培养，当丛生芽分化形成后进行中间繁殖体增殖；所述液体培养基由基本培养基+玉米素0.5-1㎎/L+胺鲜酯0.1-0.5㎎/L+硫脲5-10㎎/L+谷氨酸50㎎/L+水解酪蛋白质50-100㎎/L+葡萄糖2-5㎎/L组成；所述基本培养基由硝酸钾2600㎎/L+硫酸胺150㎎/L+二氯化钙250㎎/L+七水硫酸镁400㎎/L+磷酸氢二钾300㎎/L+硫酸亚铁15㎎/L+乙二胺四乙酸钠25㎎/L+硫酸锌10㎎/L+二氧化钛1.0㎎/L+碘化钾5.0㎎/L+烟酸5.0㎎/L+抗坏血酸0.5㎎/L+盐酸硫胺素1.0㎎/L+肌醇150㎎/L组成；

3)中间繁殖体增殖：当丛生芽分化形成后，将丛生芽切割成单株，在液体分化培养基上进行光照增殖培养，并生长成试管苗，所述液体分化培养基与所述液体培养基的组成相同；

4)生根培养：当试管苗生长到2-3㎝时，将其转入生根培养基中，在温度为23-25℃的条件下，进行生根培养；所述生根培养基由1/2基本培养基+2号ABT生根粉30-50㎎/L+谷氨酸50-100mg/L组成；所述1/2基本培养基由硝酸钾1300㎎/L+硫酸胺85㎎/L+二氯化钙125㎎/L+七水硫酸镁200㎎/L+磷酸氢二钾150㎎/L+硫酸亚铁7.5㎎/L+乙二胺四乙酸钠17.5㎎/L+硫酸锌5㎎/L+二氧化钛0.5㎎/L+碘化钾2.5㎎/L+烟酸2.5㎎/L+抗坏血酸0.25㎎/L+盐酸硫胺素0.5㎎/L+肌醇75㎎/L组成；

5)炼苗移栽：当试管苗形成2-3㎝长的根时，转移到常温下炼苗3-5天，洗净根部培养基，然后在20㎎/L的农用链霉素溶液中浸泡1-2min，移栽至消毒后的基质中，将练苗区与其他区域隔离，温度控制在23-25℃，湿度控制在80％-90％。

2.根据权利要求1所述的金钱松试管苗培育方法，其特征在于：步骤1)中，所述消毒是将洗净后的所述嫩枝用70％酒精漂洗30-38s，用无菌水冲洗3-5次，然后在10-12％过氧化氢溶液里浸泡5-10min，用无菌水冲洗3-5次，然后用20㎎/L农用链霉素浸泡20-30分钟，用无菌水冲洗3-5次，取出嫩枝用无菌干滤纸吸附后得所述培养基苗。

3.根据权利要求2所述的金钱松试管苗培育方法，其特征在于：步骤2)和步骤3)中的光照条件为：光照强度1000—2000Lx，光照时间16-18h/d。

4.根据权利要求3所述的金钱松试管苗培育方法,其特征在于：所述光照以日光灯加上白炽灯为混合光源。

5.根据权利要求1所述的金钱松试管苗培育方法，其特征在于：步骤5)中，所述基质为1：1蛭石和腐殖土混合物。

6.根据权利要求1所述的金钱松试管苗培育方法，其特征在于：所述生根培养基由1/2基本培养基+2号ABT生根粉40㎎/L+谷氨酸75mg/L组成。

7.根据权利要求1所述的金钱松试管苗培育方法，其特征在于：步骤5)中所述基质采用多菌灵消毒。