[发明专利]用于检测鸡白痢沙门氏菌的特异性引物、含有该引物的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测鸡白痢沙门氏菌的特异性引物，其特征在于所述引物由上游引物和下游引物组成，所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.含有权利要求1所述的特异性引物的PCR检测试剂盒。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于还含有PCR扩增缓冲液、阳性对照以及阴性对照。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述的阳性对照为鸡白痢沙门氏菌菌株的基因组DNA或是含有SEQ ID NO.1所示序列的载体；所述的阴性对照为无菌水。

5.如权利要求2-4任一项所述的试剂盒，其特征在于用于检测鸡白痢沙门氏菌时包括以下步骤：

步骤一，提取待检样品基因组DNA，使用权利要求2-4任一项所述的试剂盒进行PCR扩增；

步骤二，琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，判断样品是否含有鸡白痢沙门氏菌；所述判断具体为：如果电泳结果在219 bp位置出现单一的扩增条带，则说明样品中含有鸡白痢沙门氏菌；如果没有出现相应的单一扩增条带，则样品中不含有鸡白痢沙门氏菌。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，在提取待检样品基因组DNA之前，还包括使用增菌液对样本进行增菌培养的步骤，所述增菌液为亚硒酸盐胱氨酸增菌液或RV沙门氏菌增菌液体培养基。

7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，采用高温裂解法提取待检样品基因组DNA。

8.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于步骤一中所述PCR扩增所采用的检测体系为25μL反应体系包括：2×Premix Ex Taq 12.5 μL，10μM 的上下游引物各0.5μL，模板溶液1μL，最后灭菌去离子水补足至25μL；所述PCR扩增所采用的扩增程序为：先95℃预变性10min，之后开始扩增循环，每个循环的程序为：95℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，循环共35个；循环结束后，72℃延伸7min，降温至10℃，结束。

9.权利要求1所述的引物或权利要求2-7所述的试剂盒在制备检测鸡白痢沙门氏菌试剂中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于所述的试剂用于区别鸡白痢沙门氏菌与其他致病性沙门氏菌血清型以及大肠埃希氏菌，所述的其他致病性沙门氏菌血清型包括鸡伤寒和肠炎沙门氏菌血清型。