[发明专利]一种提取痕量DNA的试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种提取痕量DNA的试剂盒，试剂包括：DNA提取磁珠，裂解液，蛋白酶K溶液，洗涤液，核酸助沉剂，洗脱液；

所述的DNA提取磁珠为硅基包被的四氧化三铁磁珠，由内至外结构依次为：磁性微球核仁、聚苯乙烯密封磁铁圈、二氧化硅包被官能团层；

所述裂解液包括：终浓度为2～5mol/L的异硫氰酸胍、终浓度为50～100mmol/L的Tris-Hcl、终浓度为1％～10％的十二烷基磺酸钠或十二烷基肌氨酸钠、终浓度为1～10mmol/L的EDTA、体积百分比浓度为0.5～7％的Trition X-100、终浓度为0.1～1mol/L的可溶性盐NaCl；

所述洗涤液包括：终浓度为5～20mmol/L的Tris-HCL、体积百分比浓度70～80％的乙醇；

所述蛋白酶K浓度为5～10mg/ml；

所述核酸助沉剂为1.5％的丙烯酰胺；

所述洗脱液包括：终浓度为5-20mmol/L的Tris-HCL，PH8.0。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，磁珠直径大小为200～2000nm，官能团密度1.0～5μM/mg。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶液浓度为10mg/ml。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括：终浓度为3mol/L的异硫氰酸胍、终浓度为50mmol/L的Tris-Hcl、终浓度为2％的十二烷基磺酸钠、终浓度为10mmol/L EDTA、体积百分比为2％的Trition X-100、终浓度1mol/L的可溶性盐Nacl。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包括：终浓度为10mmol/L的Tris-HCL、体积百分比浓度80％的乙醇。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括：终浓度为10mmol/L的Tris-HCL、pH＝8.0。

7.利用权利要求1-6任意一项所述的试剂盒提取痕量DNA的方法，包括如下步骤：

(1)将样本细胞裂解；

(2)向(1)中裂解后的混合液中加入异丙醇吹打混匀；

(3)向(2)所得溶液中加入提取磁珠和核酸助沉剂，混合；

(4)将(3)所得混合液瞬时离心，吸弃液体；

(5)向(4)离心管中加洗涤液进行洗涤，吸弃洗涤液体，晾干；

(6)向(5)离心管中加入洗脱液，充分震荡混匀；

(7)将(6)所得混合液瞬时离心，将洗脱液转移至新的离心管中备用，或将(6)中加入洗脱液的磁珠混合液直接用于下游检测。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)将样本置于离心管中，加入1～10μl蛋白酶K，裂解液加入体积总和为250～500μl；

(2)将(1)中的混合液在2000rpm，55℃，10～20min的条件下充分裂解物证样本，之后向裂解后的混合液中加入与裂解液体积相同量的异丙醇混匀；

(3)向(2)中所得混合溶液中加入7～10μl提取磁珠和5～10μl核酸助沉剂，混合10min；

(4)将(3)所得混合液瞬时离心，将离心管置于磁力架上2～3min，待磁珠完全吸附，吸弃液体；

(5)向(4)离心管中加入200～400μl洗涤液，充分震荡混匀后瞬时离心，再将离心管置于磁力架上1min，待磁珠完全吸附，吸弃洗涤液，重复一次清洗步骤，晾干30s；

(6)向(5)中离心管加入10～20μl洗脱液，充分震荡混匀后将离心管放入恒温震荡混匀仪中2000rpm，55℃，10～20min；

(7)将(6)所得混合液瞬时离心，将离心管置于磁力架上2～3min，待磁珠完全吸附，将洗脱液转移至新的离心管中备用，或将步骤(6)中加入洗脱液的磁珠混合液直接用于下游检测。