[发明专利]一种治疗退行性骨关节病的注射剂及其制备方法

权利要求书

1.一种治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

步骤一，注射用人脐带间充质干细胞的制备

A、取足月妊娠，经检查无传染病的健康产妇的新生儿脐带，将其用PBS清洗干净，剪碎，加入胶原酶消化，所述胶原酶的加入量为1-4g/L，消化温度为37℃，消化时间为30分钟-90分钟，优选地为60分钟；

B、加入10-30g/L胰酶再次消化，消化温度为37℃，消化时间为30分钟-90分钟，优选地为30分钟；

C、用200目筛网过滤步骤B未消化脐带组织后，加入PBS中和，消化液与PBS比为1：10-1：15，优选地为1：12；

D、将步骤C中经过中和后的液体进行离心获得细胞，离心转速为1000转/分钟至3000转/分钟，离心时间为10分钟至20分钟；将经过离心获得的细胞接种于培养皿进行细胞培养，4天后全量换液，弃掉未贴壁细胞，以后每周半量换液2次；

步骤二，注射剂的制备

将步骤一所得到的经过培养好的细胞进行收集，添加细胞溶液制得治疗退行性骨关节病的注射剂。

2.如权利要求1所述的一种治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，其特征在于所述注射剂的间充质干细胞含量为4000万个。

3.如权利要求1所述的一种治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，其特征在于步骤一A中所述剪碎的尺寸为组织块大小为0.05mm-2mm，优选地为1.5mm；所述胶原酶的加入量为2g/L。

4.如权利要求1所述的一种治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，其特征在于步骤一B中胰酶的加入量为25g/L。

5.如权利要求1所述的一种治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，其特征在于步骤一D中离心转速优选地为2000转/分钟，离心10分钟。

6.如权利要求1所述的一种治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，其特征在于步骤一D中所用培养皿的培养基为无血清培养基，该无血清培养基中的皮生长因子和成纤维生长因子的含量各为2纳克/毫升至5纳克/毫升，优选为4纳克/毫升，无血清培养基中的氢化可的松含量为0.2至2微克/毫升，优选为1微克/毫升，肝素的含量为5至20微克/毫升，优选为15微克/毫升。

7.如权利要求1所述的一种治疗退行性骨关节病的注射剂的制备方法，其特征在于步骤二中所用的细胞溶液为生理盐水、林格氏液、复方电解质注射液或者基液。

8.一种治疗退行性骨关节病的注射剂，其特征在于采用该注射剂采用如权利要求1-4所述的方法制备得到。