[发明专利]多臂磁性复合微球固定化辣根过氧化物酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种多臂磁性复合微球固定化辣根过氧化物酶的制备方法，其特征在于，所述方法操作如下：首先取载体材料Fe₃O₄@PAA-6-arm-PEG-NH₂，加入戊二醛溶液中进行活化；再用磁铁回收载体材料，配置成浓度为4-10mg/L的悬浮液；将辣根过氧化物酶溶液与活化过的载体材料悬浮液混合，在20-45℃下孵育30-240min，用磁铁分离固定化后的载体材料，保留上清溶液待测；用缓冲溶液冲洗材料以去除未固定的辣根过氧化物酶，其中所述的多臂磁性复合微球为核-壳-壳结构。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述载体材料与戊二醛溶液的用量比例为1mg:1mL；其中戊二醛溶液浓度为0.05-0.3mol/L，所述活化的条件为50℃下活化6小时。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述载体材料与戊二醛溶液的用量比例为1mg:1mL；其中戊二醛溶液浓度为0.1 mol/L，所述活化的条件为50℃下活化6小时。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其中所述的载体材料悬浮液的浓度为7mg/L；所述孵育为在35℃下孵育180min。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述多臂磁性复合微球Fe₃O₄@PAA-6-arm-PEG -NH₂的制备方法如下：

（1）合成Fe3O4微球；

（2）合成聚丙烯酸修饰的Fe₃O₄微球；

（3）合成多臂磁性复合微球Fe₃O₄@PAA-6-arm-PEG-NH₂：

将步骤（2）制备的聚丙烯酸修饰的Fe₃O₄微球分散于水中混匀，加入6-arm-PEG-NH₂的水溶液超声溶解，先加入EDC室温下搅拌混匀，再加入EDC搅拌混匀，磁性分离产物，用去离子水洗涤至中性，放入烘箱干燥至恒重。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的聚丙烯酸修饰的Fe₃O₄微球和6-arm-PEG-NH₂ 水溶液的用量比例为200 mg ：10-30 mL；其中6-arm-PEG-NH₂的水溶液浓度为5 mg/mL。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的超声时间为 0.5-3 小时。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，第一次加入的EDC量为 30-50 mg，搅拌时间为2小时；第二次加入EDC的量为12小时，搅拌时间为12小时。

9.根据权利要求1-8中任一项权利要求所述的制备方法制备的多臂磁性复合微球固定化辣根过氧化物酶，其特征在于，所述的固定化辣根过氧化物酶由多臂磁性复合微球Fe₃O₄@PAA-6-arm-PEG -NH₂固定制备而成，所述固定化辣根过氧化物酶的最适温度为25-70℃，最适pH为5.5-8.5。

10.根据权利要求1-8中任一项权利要求所述的制备方法制备的多臂磁性复合微球固定化辣根过氧化物酶，其特征在于，所述的固定化辣根过氧化物酶由多臂磁性复合微球Fe₃O₄@PAA-6-arm-PEG -NH₂固定制备而成，所述固定化辣根过氧化物酶的最适温度为55℃，最适pH为7.0。

11.权利要求9或10所述的多臂磁性复合微球固定化辣根过氧化物酶用于对污染物苯酚的降解。