[发明专利]一种无血清肿瘤干细胞培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种无血清肿瘤干细胞培养基，所述无血清肿瘤干细胞培养基含有MCDB153基础培养基、细胞因子、蛋白多肽、抗生素、肾上腺素、硒、碳酸氢钠、脂类和红树林内生真菌代谢产物4(15)‑桉叶烯‑5,7‑二羟基‑1‑酮。本发明的肿瘤干细胞培养基不含血清，配方成分确定，具有较高的安全性，该无血清干细胞培养基可从恶性肿瘤细胞株和肿瘤组织中高效地富集肿瘤干细胞，能使肿瘤干细胞稳定生长，并维持其良好的细胞活性和生理特性，非常适合应用于肿瘤细胞及肿瘤干细胞的相关研究领域。

技术领域

本发明属于细胞生物学研究领域，具体的，本发明涉及一种无血清肿瘤干细胞培养基及其应用，更具体的，本发明涉及一种添加红树林内生真菌代谢产物4(15)-桉叶烯-5,7-二羟基-1-酮的无血清肿瘤干细胞培养基及其用于培养肿瘤细胞株的应用。

背景技术

干细胞是一类具有自我更新、多向分化潜能，并能无限增殖分裂的慢周期细胞，其相关研究在生物发育、基因治疗、药物筛选和器官移植等方面发挥着日益重要的作用。近年来，随着对干细胞生理特性研究的不断深入，研究者们发现恶性肿瘤进行性生长、复发和转移等与干细胞诸多基本特性极其相似，因此，干细胞与肿瘤的关系也就成为了当前肿瘤研究领域的一大热点。肿瘤是一种异质性的组织，肿瘤细胞受复杂的微环境影响，在增殖过程中不断获得基因突变，导致肿瘤组织中有多种表型和分化程度不同的肿瘤细胞。肿瘤干细胞(Tumor Stem Cell，TSC；也称癌干细胞Cancer Stem Cell，CSC)是存在于肿瘤组织中具有自我更新，自我复制能力的细胞，肿瘤干细胞对化疗药物和放射线治疗具有很强的耐受性，并且可以分化出不同表型的肿瘤细胞，重建肿瘤组织的异质性。对肿瘤干细胞的深入研究，有助于了解肿瘤发生、发展和转移的分子机理，对肿瘤的早期检测、治疗和诊断都有重要的临床意义。因此，从肿瘤细胞中分离富集肿瘤干细胞以及在体外快速培养成为了研究肿瘤干细胞以及临床研究中的一个重要手段。

目前肿瘤干细胞一般采用含有血清的或不含血清的干细胞培养基，含有血清的培养基容易造成肿瘤干细胞的分化，且培养基所含的血清中有很多未知成分，这些未知成分将对肿瘤干细胞带来不可预测的影响。无血清的干细胞培养基通常成分比较复杂成本较高，肿瘤干细胞在上述这些培养基中扩增速度也较慢，不易传代，无法满足大规模的研究需求。从肿瘤组织消化得来的肿瘤细胞悬液或肿瘤细胞株中分离富集肿瘤干细胞的方法主要有利用细胞表面分子标记物(常用如CD133)通过流式细胞分选得到目的细胞。另一种方法是利用侧群(side population,SP)分选分离肿瘤干细胞。由于肿瘤干细胞大多高表达ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member 2)，其可以将药物有效地泵出胞外，因此在利用Hoechst荧光染料进行流式细胞分选时，就会形成Hoechst低染区，即SP细胞群。上述方法分离富集肿瘤干细胞需要贵重的仪器设备，耗时且费用也较高。

因此，因此迫切需要一种成本低廉、简单高效的适合于肿瘤干细胞的富集和快速扩增的无血清细胞培养基。

发明内容

红树林内生真菌是近年海洋创新药物研究最为活跃的领域之一。本发明人的研究团队在红树林微生物代谢产物研究过程中发现，红树林微生物的大多数代谢产物具有抗氧化、抗炎和促进细胞生长修复的作用。近年来，在深入研究中，本发明人也发现了对干细胞的增生具有促进作用的代谢产物4(15)-桉叶烯-5,7-二羟基-1-酮。

本发明运用红树林内生真菌代谢产物为4(15)-桉叶烯-5,7-二羟基-1-酮对干细胞增殖的促进作用，配制含有4(15)-桉叶烯-5,7-二羟基-1-酮干细胞培养基。本发明目的在于提供一种成本低廉、简单高效的适用于人肿瘤干细胞快速增殖生长的无血清培养基，本发明的另一目的是提供一种无血清肿瘤干细胞培养基的配制方法，本发明的另一目的是提供一种适用于人肿瘤干细胞富集的培养方法。