[发明专利]筛选主动脉夹层外周血小分子代谢标志物的方法及其应用

权利要求书

1.一种筛选主动脉夹层外周血小分子代谢标志物的方法，其特征在于通过色谱与质谱联用方法LC-MS，对符合纳入标准的主动脉夹层患者样本进行代谢组学分析，明确主动脉夹层外周血小分子代谢谱，得到N1-乙酰基-N2-甲酰基-5-甲氧基犬尿氨酸、甘油磷酰胆碱、2-巯基组氨酸甜菜碱三种差异性最大的小分子代谢诊断标志物；

其中，色谱条件为：

安捷伦QTOF-6545系统，色谱柱Agilent Eclipse-C18 column柱——3×100mm,1.8μm，柱温，40℃；

流动相A为含0.1～0.3％甲酸的水V/V，流动相B为含0.1～0.3％甲酸乙腈V/V；

流速为0.1～0.5mL/min，进样量为3～5μL；

流动相梯度如下表：

质谱条件为：

AJS源，扫描方式为ESI+模式；

毛细管电压为1.4kV和1.3kV，锥孔电压为40和23V；

离子源温度为18～22℃，脱溶剂气温度为340～360℃；

锥孔气流量8～12L/h，脱溶剂气流量550～650L/h；

碰撞能量10～40V，离子能量1V，每0.2s采集1次图谱；

准确质量测定采用芦丁溶液为锁定质量溶液，质量扫描范围为50～1500m/z。

2.根据权利要求1所述筛选主动脉夹层外周血小分子代谢标志物的方法，其特征在于所述样本纳入标准为采用CTA、DSA或MRA确诊为主动脉夹层且初次发病至采样的时间间隔小于或等于14日的患者样本。

3.根据权利要求2所述筛选主动脉夹层外周血小分子代谢标志物的方法，其特征在于所述样本的排除标准为，外伤导致主动脉各类损伤的患者；或初次发病至采样时间间隔超过14日的主动脉夹层患者；急性或慢性感染性疾病患者、结缔组织疾病患者、恶性肿瘤患者；长期服用免疫制剂患者；有下肢静脉血栓史、心肌梗死史、严重肝肾功能不全、严重电解质紊乱的患者；高血压病史或者具有家族遗传高血压史；自身免疫疾病或遗传综合征患者。

4.根据权利要求3所述筛选主动脉夹层外周血小分子代谢标志物的方法，其特征在于患者在确定纳入排除标准后进行全血收集，并进行血清分离操作，37℃孵育50～70min，1800～2200rpm离心3～6min，取上清冻存于负80℃冰箱。

5.根据权利要求4所述筛选主动脉夹层外周血小分子代谢标志物的方法，其特征在于取100μL血清加入0.2～0.5mL甲醇，震荡25～35s，静置90～150s，超声28～32min，12000rpm，4℃离心10～15min，取200μL于进样小瓶中，4℃保存待测。

6.根据权利要求5所述筛选主动脉夹层外周血小分子代谢标志物的方法，其方法特征在于使用PCA分析、PCA特征分析、火山图分析的手段实现主动脉夹层血清代谢物质指纹图谱的建立，实现定量对比分析。

7.根据权利要求3所述筛选主动脉夹层外周血小分子代谢标志物的方法，其方法特征在于使用信息对等的正常人血清作为对照组，高血压患者作为阳性对照组。