[发明专利]珙桐冬芽快速繁殖的培养方法

权利要求书

1.一种珙桐冬芽快速繁殖的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采集1～2年生珙桐未萌发的冬芽为外植体材料；

(2)消毒灭菌；

将冬芽置于浓度为3～5g/mL的洗衣粉溶液中浸泡2～3min，修整冬芽，使其仅剩0.3～0.5cm的芽端，用75％乙醇浸泡10～30s，再用0.01％升汞溶液浸泡1～7min；或仅使用0.01％升汞溶液浸泡冬芽1～8min；

(3)冬芽初代培养

向WPM培养基中加入NAA、6-BA、GA₃和AC，调节培养基pH值为5.8～6.0，于120～125℃灭菌20～25min，冷却至室温，备用；然后将步骤(2)中消毒后的冬芽接种至培养基中，于24±1℃、2000～2100lx条件下，光照8～10h/d，培养至冬芽萌发为带芽茎段；其中，NAA加入量为0～0.4mg/L、6-BA加入量为2.0～4.0mg/L、GA₃加入量为0～2.0mg/L、AC加入量为1.0～1.5g/L；

(4)增殖培养

将步骤(3)所得产物接种至含有NAA、6-BA和AC的WPM培养基中，于24±1℃、2000～2100lx条件下，光照8～10h/d，增殖培养，得到珙桐苗；其中，WPM培养基中NAA加入量为0.2～0.6mg/L、6-BA加入量为1.0～4.0mg/L、AC加入量为0.5～1.5g/L；

(5)壮苗培养

用含有NAA、6-BA、GA₃和AC的WPM培养基，于24±1℃、2000～2100lx条件下，光照8～10h/d，培育步骤(4)中所得珙桐苗；其中，NAA加入量为0.5～1.5mg/L、6-BA加入量为0.2～1.0mg/L、GA₃加入量为0.5～1.5mg/L、AC加入量为0.5～1.5g/L；

(6)生根培养

选取步骤(5)中生长状态良好的珙桐苗，采用含有IBA、6-BA和AC的White培养基，于24±1℃、2000～2100lx条件下，光照8～10h/d，培养至生根；其中，IBA的加入量为2.0～4.0mg/L、6-BA的加入量为0～1.5mg/L、AC的加入量为0.5～1.5g/L；

(7)炼苗移栽

在生根培养后7～15d，对珙桐苗进行闭罐炼苗15～2d，遮阴度为50％～70％，再开罐炼苗3～7d，然后将珙桐苗移出，消毒灭菌，移栽至经消毒处理的基质中，浇足定根水，每5d喷施一次营养液；其中，基质为草炭、珍珠岩和蛭石的混合物，草炭、珍珠岩和蛭石重量比为1～2:0.5～1:0.5～1；

(8)移栽后按常规方法进行水肥管理，培育得到珙桐树苗。

2.根据权利要求1所述的珙桐冬芽快速繁殖的培养方法，其特征在于，步骤(3)中所述WPM培养基中NAA加入量为0.3mg/L、6-BA加入量为2.0mg/L、GA₃加入量为2.0mg/L、AC加入量为1.5g/L。

3.根据权利要求1所述的珙桐冬芽快速繁殖的培养方法，其特征在于，步骤(4)中所述WPM培养基中NAA加入量为0.4mg/L、6-BA加入量为4.0mg/L、AC加入量为1.5g/L。

4.根据权利要求1所述的珙桐冬芽快速繁殖的培养方法，其特征在于，步骤(5)中用于壮苗培育的WPM培养基中NAA加入量为1.0mg/L、6-BA加入量为1.0mg/L、GA₃加入量为1.0mg/L、AC加入量为1.0g/L。

5.根据权利要求1所述的珙桐冬芽快速繁殖的培养方法，其特征在于，步骤(6)中所述用于生根培育的White培养基中IBA的加入量为3.0mg/L、6-BA的加入量为1.0mg/L、AC的加入量为1.0g/L。

6.根据权利要求1所述的珙桐冬芽快速繁殖的培养方法，其特征在于，步骤(7)中所述基质中草炭、珍珠岩和蛭石的重量比为2:1:1。

7.根据权利要求1所述的珙桐冬芽快速繁殖的培养方法，其特征在于，步骤(7)中所述基质的消毒过程如下：

将基质置于0.1MPa的灭菌锅中，保持20～30min；或者采用5％的福尔马林或0.3％的硫酸铜溶液淋透基质，再以塑料布覆盖7d。

8.根据权利要求1所述的珙桐冬芽快速繁殖的培养方法，其特征在于，步骤(7)中珙桐苗的消毒过程如下：

采用0.1％～0.3％的高锰酸钾溶液或500倍多灵菌溶液清洗珙桐苗2～3次。