[发明专利]一种木藤蓼降尿酸降血糖作用的研究方法有效
申请号: | 201710766451.X | 申请日: | 2017-08-30 |
公开(公告)号: | CN107462683B | 公开(公告)日: | 2020-11-24 |
发明(设计)人: | 芦永昌;钱帅;张忠梅;吕倩;张弓;史生辉;王庶 | 申请(专利权)人: | 青海民族大学 |
主分类号: | G01N33/15 | 分类号: | G01N33/15;G01N33/66;A61K36/704;A61K31/515;A61P3/10 |
代理公司: | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人: | 董芙蓉 |
地址: | 810008 青海省西宁*** | 国省代码: | 青海;63 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 木藤蓼降 尿酸 血糖 作用 研究 方法 | ||
1.一种木藤蓼降尿酸降血糖作用的研究方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1、关于降尿酸的供试品的制备
依据药材常用量2~6g,本试验以口服生药量6g作为成人60kg最大日用量,按照实验动物与人用药量的换算公式计算,得到小白鼠的用药量1.2g/Kg;设此为中剂量组,在此数据上加减分设高剂量和低剂量;即高剂量组2.4g/Kg、中剂量组1.2g/Kg、低剂量组0.6g/Kg;取木藤蓼冻干粉,均用0.5%CMC-Na溶液准确配置供试溶;
步骤2、关于降尿酸的造模剂的配制
精密称取氧嗪酸钾5g,研磨后加入0.5%CMC-Na溶液至0.4L,超声分散,配置成12.5mg/ml的氧嗪酸钾混悬液,临用前摇匀,使其均匀分散;
步骤3、关于降尿酸的阳性药的配制
取别嘌醇100mg1片,研磨后加入0.5%CMC-Na溶液至0.4L,超声分散,配置成0.25mg/ml的混悬液,临用前摇匀,使其均匀分散;
步骤4、关于降尿酸的造模与给药
小鼠每组10只,随机分为6组,依次为空白对照组、模型对照组、别嘌醇组,木藤蓼高、中、低剂量组;分组后开始给药造高尿酸模型,除空白对照组给予等容积的溶媒,其余每组小鼠均给氧嗪酸钾250mg/kg制备高尿酸模型,造模1h后除空白对照组和模型对照组给与等溶剂的溶媒外,其余各组分别给于相应地治疗药物,以上给药方式均为灌胃给药,给药容积为0.2ml/10g,每日造模和给药各一次,持续给药7天;
步骤5、关于降尿酸的取材与检测
末次给药1h后眼眶取血,室温下自然凝血1h,3000rpm离心5min,分离得到血清;按尿酸测试剂盒说明书采用磷钨酸还原法测量血清尿酸Serum Rric Acid,SUA;
计算公式:
血清尿酸含量其中标准品浓度50mg/L
解剖取适量小鼠肝组织称重,加入9倍量的生理盐水,制备10%肝匀浆液,3000rpm离心10min,取上清液,按照黄嘌呤氧化酶检测试剂盒方法测定黄嘌呤氧化酶活性XanthineOxidase,XOD;计算公式:
其中黄嘌呤摩尔消光系数为12.6×10-3,光径为1cm,匀浆蛋白含量为227g/L,反应时间为20min,于530nm处测吸光度值;
步骤6、关于降尿酸的统计学处理
所得数据用SPSS 16.0软件分析,用表示;采用单因素方差分析进行组间显著性检验;
步骤7、关于降血糖的供试品的制备
依据药材常用量2~6g,本试验以口服生药量6g作为成人60kg最大日用量,按照实验动物与人用药量的换算公式计算,得到小白鼠的用药量1.2g/Kg;取木藤蓼冻干粉,均用蒸馏水溶解准确配置供试溶液;
步骤8、关于降血糖的造模剂的配制
四氧嘧啶很容易氧化,必须在临用前配制;将四氧嘧啶用生理盐水溶解,配成2%的溶液;
步骤9、关于降血糖的阳性药的配制
取盐酸二甲双胍1片500mg,加入生理盐水至0.4L,配置成浓度为12.5mg/ml;
步骤10、糖尿病模型的建立
步骤11、关于降血糖的动物分组及给药
选取造模成功的小鼠50只,按照血糖值均衡原则分为4个组,分别为模型组、阳性对照组、盐酸苯乙双胍组、 木藤蓼提取物组;分组次日开始每天灌胃均按0.2ml/10g给相应的药物,空白对照组和模型对照组予以等体积蒸馏水,连续给药7天;末次给药后禁食不禁水12h,尾静脉取血测空腹血糖值;
步骤12、给药前后体重变化
记录造模后给药前的体重与给药后的体重变化;
步骤13、脏器系数的变化
给药后,处死小鼠,解剖,取其肝脏、肾脏、脾脏、胰腺,称重,并计算脏器系数;
步骤14、关于降血糖的统计学处理
采用计算机的统计软件spss16.0对实验数据进行分析,计量资料数据以表示;
与空白对照组比较,模型对照组小鼠SUA水平显著升高,表明建模成功;与模型对照组相比,别嘌醇组和木藤蓼高剂量组均可有效降低模型动物SUA水平且均具有极显著差异;
与空白对照组比较,模型对照组小鼠肝脏XOD水平有显著升高;木藤蓼三个剂量组对小鼠肝脏XOD水平均有降低,且随剂量增加,小鼠肝脏XOD水平有增加趋势。
2.根据权利要求1所述的木藤蓼降尿酸降血糖作用的研究方法,其特征在于,步骤10中所述糖尿病模型的建立,具体为:
取80只健康小鼠,雄性,体重18~22g;每天早上固定时间点空腹称重;适应性饲养3天后,禁食不进水12h;随机取8只作为空白对照组;其余小鼠腹腔注射四氧嘧啶100mg/Kg,连续给药2天;空白对照组腹腔注射等体积无菌注射用水;恢复饮食72h后称重,同时禁食不禁水12小时,尾静脉取血,用GA-3型血糖仪测血糖值,选取血糖11.1mmol/L的小鼠作为造模成功的实验性糖尿病小鼠。
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