[发明专利]含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏及制备与应用

权利要求书

1.一种含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏，其特征在于包含如下按质量百分比计的组分：

2.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏，其特征在于包含如下按质量百分比计的组分：

3.根据权利要求1或2所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏，其特征在于：

所述的摩擦剂为云石粉、二氧化硅、碳酸钙、焦磷酸钙、磷酸氢钙和氢氧化铝中的至少一种；

所述的保湿剂为聚乙二醇、丙二醇、山梨醇和甘油中的至少一种。

4.根据权利要求1或2所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏，其特征在于：

所述的增稠剂为黄原胶、羟丙基瓜尔胶和羧甲基纤维素钠中的至少一种；

所述的发泡剂为月桂醇硫酸钠和十二烷基硫酸钠中的至少一种；

所述的缓冲剂为磷酸氢二钠和焦磷酸钠中的至少一种。

5.根据权利要求1或2所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏，其特征在于：

所述的SEB蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

6.根据权利要求5所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏，其特征在于：

编码所述的SEB蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

7.根据权利要求5所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏，其特征在于：

所述的SEB蛋白的制备方法，包含如下步骤：

(1)通过全基因合成，得到如SEQ ID NO.1所示的编码重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的基因；

(2)使用引物X5523-1和引物X5523-34对步骤(1)得到的基因进行PCR扩增，得到目的片段并回收纯化；

(3)将步骤(2)回收纯化后的目的产物与载体进行连接，得到重组质粒；

(4)将步骤(3)制得的重组质粒转入宿主细胞中，得到表达重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的菌株；

(5)将步骤(4)制得的表达重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的菌株作为表达菌株，基于大肠杆菌表达系统进行诱导表达；离心收集菌体，洗涤悬浮，然后超声破碎，离心，收集上清，纯化，得到SEB蛋白。

8.根据权利要求7所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏，其特征在于：

步骤(3)中所述的载体为pET-32a；

步骤(4)中所述的宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。

9.根据权利要求7所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏，其特征在于：

步骤(5)中所述的纯化，包含如下步骤：

(Ⅰ)第一次镍琼脂糖亲和层析

①将Ni-IDA装柱，用3倍柱床体积的Binding buffer1清洗平衡柱子，流速5mL/min；

②将超声破碎、离心、收集得到的上清上柱，流速为2mL/min；

③5倍柱床体积的Binding buffer1清洗柱子，流速3mL/min；

④Wash Buffer洗杂，流速3mL/min，收集穿透液；

(Ⅱ)酶切去除蛋白标签

将步骤(Ⅰ)收集的穿透液进行透析，然后加入TEV酶，酶切去除标签，得到酶切后的穿透液；

(Ⅲ)第二次镍琼脂糖亲和层析

①将Ni-IDA装柱，用3倍柱床体积的Binding buffer2清洗平衡柱子，流速5mL/min；

②将步骤(Ⅱ)酶切后的穿透液上柱，流速为2mL/min，收集穿透液；

(Ⅳ)过滤

将步骤(Ⅲ)收集的穿透液经过0.22μm CA滤膜过滤，得到SEB蛋白。

10.权利要求1～9任一项所述的含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白和虾青素的软膏在日化领域中的应用。