[发明专利]mir‑3613及其成熟miRNA的新用途

说明书

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体的涉及食管鳞癌相关的miRNA及其应用，更具体的涉及mir-3613及其成熟miRNA在制备食管鳞癌诊断制剂中的应用。

背景技术

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤，每年全世界约有30万人死于食管癌，其发病率和死亡率居恶性肿瘤前几位。我国是食管癌高发的国家之一，尤其是食管鳞癌(ESCC)为我国食管癌的主要病理类型。当前食管鳞癌治疗是基于根治性切除术联合围手术期化疗或化放疗的模式，但是其病程进展快，预后差，远期疗效仍不尽人意，5年总生存率很低，预后效果不理想。目前尚无理想、可靠的食管鳞癌诊断标志物。因此，寻找能早期诊断食管鳞癌的分子标志物，或可为食管鳞癌诊断和预后的改善提供新的策略。

miRNA是一类内源性、高度保守的、长度大约为22个核苷酸的非编码小分子RNA。miRNA通过其5'端可以与靶基因的3'端非翻译区(3'UTR)特异性结合，在转录后水平发挥调控作用。当miRNA与靶基因3'UTR以碱基完全互补配对的方式结合会引起靶mRNA的降解，而通过非完全互补配对结合的方式则会抑制 mRNA的蛋白翻译。近年来，循环miRNA作为各类疾病标志物的研究备受关注。循环miRNA是指存在于血清、血浆、一些体液如唾液、尿液和脑脊液中，游离于组织外的miRNA的统称。循环miRNA作为一个较新且有前景的研究领域，近几年关于其作为肿瘤诊断标志物的研究成为热点。

本发明对3例发生转移的食管鳞癌组织、3例未发生转移的食管鳞癌组织及 6例癌旁组织的样本进行转录组测序，并运用生物信息学方法进行分析，找到一些与食管鳞癌相关的分子标志物，其中miR-3613-5p在癌组织中的表达量高于癌旁组织，进一步，荧光定量PCR实验结果与高通量测序结果一致。本发明为临床食管鳞癌的精准诊断提供了潜在的分子标志物，具有重要的实际应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种食管癌诊断试剂，所述诊断试剂检测样本中 mir-3613和/或其成熟miRNA的表达情况。

所述mir-3613序列见SEQ ID NO 1：

ugguuggguuuggauuguuguacuuuuuuuuuuguucguugcauuuuuaggaacaaaaaaaaaagcccaacc cuucacaccacuuca，其成熟miRNA为miR-3613-5p和miR-3613-3p，序列见SEQ ID NO 2：uguuguacuuuuuuuuuuguuc和SEQ ID NO 3：acaaaaaaaaaagcccaacccuuc。

进一步，食管癌包括食管鳞癌和食管腺癌，优选为食管鳞癌。

所述的样本为肿瘤组织或外周血。

进一步，食管鳞癌诊断试剂基于高通量测序方法和/或基因芯片法和/或定量 PCR方法和/或探针杂交方法检测样本中mir-3613和/或其成熟miRNA的转录情况。

高通量测序方法主要是指454life sciences公司、ABI公司和illumina公司推出的二代测序技术以及helicos heliscope^TM和pacific biosciences的单分子测序技术。

优选采用二代测序方法、单分子测序方法、northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测样本中mir-3613和/或其成熟miRNA的转录。

优选的，所述的用于定量PCR方法包括特异性扩增mir-3613和/或其成熟 miRNA的引物；所述的基于探针杂交方法包括与mir-3613和/或其成熟miRNA 的核酸序列杂交的探针。

进一步，加尾法扩增miR-3613-5p的引物为序列SEQ ID NO 4：

tgttgtacttttttttttgttc。

本发明的目的还在于提供上述mir-3613和/或其成熟miRNA在制备食管鳞癌诊断工具中的应用。

本发明的目的在于提供一种治疗食管鳞癌药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含：

(a)化合物或组合物，所述化合物下调mir-3613和/或其成熟miRNA的转录和/或抑制mir-3613和/或其成熟miRNA的活性；

(b)药剂学上能接受的载体。