[发明专利]尿液的处理方法、抗生素的检测方法及应用

权利要求书

1.一种尿液的处理方法，其特征在于，包括如下步骤：

将尿液取样后离心取上清液，然后向上清液中加入酸化乙腈后超声处理，再加入无水硫酸钠，然后离心取上清液，氮吹干后用溶剂定容，得到待检测的样品；超声处理的时间为25-40min；尿液的上清液与酸化乙腈的体积比为1:1-2。

2.根据权利要求1所述的尿液的处理方法，其特征在于，在加入无水硫酸钠，然后离心取上清液的步骤中，离心速度为4000-5000转/min，离心时间3-5min。

3.根据权利要求2所述的尿液的处理方法，其特征在于，氮吹后用溶剂定容的步骤中，所用溶剂为甲酸水溶液与甲醇的混合溶液。

4.根据权利要求3所述的尿液的处理方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)将尿液离心后取上清液，冷藏保存；

(b)向步骤(a)的上清液中加入酸化乙腈，上清液与酸化乙腈的体积比为1:1-2，然后超声处理；

(c)向超声处理后的液体中加入无水硫酸钠，再以4000-5000转/min的速度离心3-5min，取上清液；

(d)将步骤(c)得到的上清液氮吹干，再用溶剂定容，得到待检测的样品。

5.一种抗生素的检测方法，其特征在于，采用权利要求1-3任一项所述的尿液的处理方法处理尿液，得到待检测样品，采用液质联用仪对尿液中的抗生素进行检测，得到尿液中抗生素的含量；

检测条件为：

色谱柱选用C18柱，规格为100mm×2.1mm，1.7μm；

流动相：A液为0.1％甲酸水溶液，B液为甲醇溶液，采用梯度洗脱；

离子源：ES+；

检测模式：多反应MRM模式；

离子源电压：2.5-3kV；

脱溶剂气温度：300-500℃；

脱溶剂气流速：800-1000L/Hr；

反吹气流速：50-100L/Hr；

最低检出限：1ng/mL；

检测时间：8min；

抗生素的含量计算公式为：

其中，C为尿液中抗生素的浓度，ng/mL；C_y为仪器检测的抗生素的浓度，ng/mL；V_d为氮吹后溶剂定容的体积，mL；W为尿液取样量，mL；

梯度洗脱的具体条件为：

0-2min，90％A液+10％B液；

2-4min，50％A液+50％B液；

4-6min，10％A液+90％B液；

6-8min，10％A液+90％B液；

8min以后，90％A液+10％B液；

流速为0.3mL/min；

抗生素为恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、氟罗沙星、奥比沙星、依诺沙星、氟甲喹、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺氯哒嗪、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺多辛、磺胺苯吡唑、磺胺硝苯、磺胺喹沙啉、磺胺苯酰、磺胺吡啶、磺胺索嘧啶、强力霉素、金霉素、土霉素和四环素。

6.根据权利要求5所述的抗生素的检测方法，其特征在于，还包括配制标准工作曲线的步骤。

7.根据权利要求6所述的抗生素的检测方法，其特征在于，配制标准工作曲线的步骤为：配制抗生素混标储备液和工作溶液，最后配制成梯度浓度的标准工作溶液。

8.权利要求1-4任一项所述尿液的处理方法或权利要求5-7任一项所述的抗生素的检测方法在检测尿液中抗生素中的应用。