[发明专利]一种制备活化猪血浆凝血因子X的方法

权利要求书

1.一种制备活化猪血浆凝血因子X的方法，其特征在于，包括：

步骤1：猪血浆用复合层析填料进行柱层析，用0.02Mtris-Hcl缓冲液pH7.4充分冲洗未结合的杂蛋白，缓冲液阶段洗脱，收集pH为3.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的洗脱液；所述复合层析填料为Capto Adhere填料或PPA HyperCel填料；所述阶段洗脱为用含0.1 M NaCl的pH6.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、0.15 M NaCl 的pH5.8的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、0.05M NaCl 的pH 3.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液依次洗脱；

步骤2：加入激活剂激活凝血因子X；加入柠檬酸钠固体室温下活化23h，再加入RVV-X冻干粉、氯化钙溶液和兔脑磷脂37℃下活化3小时；

步骤3：柱层析纯化活化的凝血因子X；所述柱层析的层析柱为苯甲脒亲和层析柱；步骤3所述柱层析具体为激活后的活化的凝血因子X直接上样至平衡好的层析柱，依次用含0.5M、0.8M、1.0M、1.3M浓度NaCl的pH6.0的缓冲液进行阶段洗脱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中所述猪血浆在用复合层析填料进行分离纯化前还包括猪血浆粗提取的步骤；所述猪血浆粗提取为猪血浆加入氯化钡溶液混匀后离心收集沉淀。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述激活步骤中的RVV-X的终浓度为0.5mg/ml, 氯化钙溶液的终浓度为0.02M，兔脑磷脂的终浓度为5 ml/L；柠檬酸钠的终溶度为0.35 g/ml。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤3纯化后还包括加入缓冲剂、赋形剂和冻干保护剂冷冻干燥的步骤。