[发明专利]一种桃红四物汤的药物制剂的检测方法

权利要求书

1.一种桃红四物汤的药物制剂的检测方法，其特征在于，

该方法包括如下建立桃红四物汤的药物制剂的指纹图谱的方法的步骤：

取待测药物制剂1~5重量份，精密称定，置20~100mL具塞锥形瓶中，精密加入水或体积浓度为20%~70%的甲醇水溶液或甲醇10~50体积份，称定重量，超声处理10~30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

取羟基红花黄色素A适量，加水或体积浓度为20%~70%的甲醇水溶液或甲醇制成每1mL含羟基红花黄色素A50~200μg的溶液，即得对照品溶液；

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05%~0.3%磷酸溶液为流动相B，按如下程序进行梯度洗脱：0-12min，A：B为2%：98%；12-16min，A：B为2%：98%→5%：95%；16min，A：B为5%：95%；16-50min，A：B为5%：95%→18%：82%；50min，A：B为18%：82%；50-65min，A：B为18%：82%→27%：73%；65min，A：B为27%：73%；65-75min，A：B为27%：73%→50%：50%，75min，A：B为50%：50%；流速为0.8~1.2mL/min，柱温为25~35℃，检测波长为210-400nm，理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000；

分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5~20μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；

所述重量份与所述体积份的关系为g/mL；

还包括如下鉴别或含量测定方法中的至少一种：

B、桃仁、白芍、苦杏仁苷和芍药苷的鉴别

取待测药物制剂1~5重量份，研细，加甲醇10~50体积份，超声处理10~60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5~20体积份微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂，用体积浓度为1~10%的氨溶液10~100体积份洗脱，弃去氨液，再用水10~50体积份洗脱，弃去水液，继用体积浓度为10%~40%的乙醇水溶液10~50体积份洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1~5体积份使溶解，作为供试品溶液；

另取桃仁对照药材粗粉0.1~0.5重量份，加60~90℃的石油醚5~20体积份，加热回流0.5~2小时，滤过，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇5~20体积份，加热回流0.5~2小时，放冷，滤过，取滤液作为桃仁对照药材溶液；

取白芍对照药材粉末0.1~1重量份，加甲醇5~20体积份，超声处理5~30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5~2体积份使溶解，作为白芍对照药材溶液；

取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.5~5mg的溶液，作为苦杏仁苷对照品溶液；

取芍药苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.5~3mg的溶液，作为芍药苷对照品溶液；

照薄层色谱法试验，分别吸取桃仁对照药材溶液、白芍对照药材溶液、苦杏仁苷对照品溶液、芍药苷对照品溶液和供试品溶液各1~10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15∶40∶22∶10的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水在5~10℃放置5~20小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，于105℃加热至斑点显色清晰；

C、当归和川芎的鉴别

取待测药物制剂2~10重量份，研细，加20~100体积份甲醇，超声处理10~60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10~40体积份使溶解，用乙醚萃取1~3次，每次10~30体积份，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1~5体积份使溶解，作为供试品溶液；

取当归对照药材0.1~1重量份，加水10~50体积份，超声处理5~30分钟，离心，上清液蒸至近干，加甲醇10~30体积份，超声5~30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5~20体积份使溶解，用乙醚萃取1~3次，每次5~20体积份，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1~5体积份使溶解，作为当归对照药材溶液；

取川芎对照药材0.5~3重量份，加水10~30体积份，超声处理10~30分钟，离心，上清液蒸至近干，加甲醇10~30体积份，超声5~30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5~20体积份使溶解，用乙醚萃取1~3次，每次5~20体积份，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1~3体积份使溶解，制成川芎对照药材溶液；

照薄层色谱法试验，分别吸取当归对照药材溶液5~15μL、川芎对照药材溶液各5~15μL和供试品溶液2~10μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以体积比为4∶1∶1∶0.1的环己烷：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365mn下检视；

D、红花和羟基红花光色素A的鉴别

取待测药物制剂0.5~5重量份，研细，加体积浓度为50%~90%的丙酮溶液5~20体积份，密塞，超声处理5~30分钟，静置，取上清液作为供试品溶液；

取红花对照药材0.1~1重量份，加体积浓度为50%~90%的丙酮溶液5~20体积份，密塞，超声处理5~30分钟，静置，取上清液作为红花对照药材溶液；

再取羟基红花黄色素A对照品，加甲醇制成每1mL含0.1~1mg的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、红花对照药材溶液、羟基红花黄色素A对照品溶液各1~5μL，分别点于同一聚酰胺薄膜板上，以体积浓度为4∶2∶7的甲醇-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365mn下检视；

E、苦杏仁苷的含量测定

取待测药物制剂1~3重量份，研细，精密称定，置20~100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为10%~50%的甲醇水溶液10~50体积份，称定重量，超声处理5~30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加50~90%甲醇制成每1mL含苦杏仁苷100~500μg的溶液，即得对照品溶液；

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含有体积浓度为10~20%的四氢呋喃的乙腈为流动相A、含有体积浓度为0.05~0.2%的磷酸的水为流动相B，以A：B体积比为5∶95混合液为流动相，柱温25~35℃，流速0.5~1.5mL/min；检测波长为270~280mn，理论板数按苦杏仁苷峰计算应不低于5000；

分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各5~20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。