[发明专利]一种检测B族链球菌及其耐药性的LAMP引物组合物、试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明属于分子诊断领域，更具体地，涉及一种检测B族链球菌及其耐药性的LAMP引物组合物、试剂盒及方法。

背景技术

B群链球菌(Group B streptococcus，GBS)又称无乳链球菌，寄生于人类下消化道及泌尿生殖道，新生儿GBS感染与母亲生殖道及肠道GBS定植关系密切，该菌在健康妇女阴道定植率是10％～30％，是围产期母婴感染的主要致病菌之一，可引起新生儿肺炎、脑膜炎，甚至败血症，严重的可导致死亡。GBS感染在欧美国家发病率较高，1996年，美国制定了预防GBS感染方针，推荐对妊娠35～37周的孕妇进行产前GBS筛查和产时抗生素预防。抗生素预防推荐用药首选青霉素，对β-内酰胺类过敏的孕妇，大环内酯类药物(红霉素)和林可霉素类药物(克林霉素)被作为替代药物。随着抗生素治疗时间的延长，GBS对红霉素、克林霉素的耐药率逐年升高，对其是否适宜作为二线预防药物存在争议。因此，对孕妇携带的GBS及其耐药性进行快速鉴定，对于用药指导和疾病预防非常有应用价值。

目前，GBS的检测方法主要是传统分离培养法和PCR检测法，现有的检测方法普遍存在特异性不强、灵敏度欠佳的问题；其中分离培养法在需要耗时2～3天，并且假阴性率较高，PCR检测法则灵敏度一般是1～100pg/μl细菌DNA，并不是太理想。此外，GBS对抗生素耐药性的现有评价方法耗时长，并且准确度不高，如药敏实验，容易受人为因素、培养基、药物含量影响较大，以上现有技术均难以满足对GBS及其耐药性的高准确度、高灵敏度、高特异性等要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测B族链球菌及其耐药性的LAMP引物组合物；

本发明的另一目的在于提供一种检测B族链球菌及其耐药性的试剂盒；

本发明的再一目的在于提供一种检测B族链球菌及其耐药性的方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种检测B族链球菌及其耐药性的LAMP引物组合物，包括：

检测B族链球菌的cfb基因的LAMP引物组，包括一对内引物、一对外引物、一对环引物，其核苷酸序列如下：

FIP-cfb：5’-AGCTTAGTTATCCCAAATCCCACTATTGGTAGTCGTGTAGAAGC-3’；

BIP-cfb：5’-TCCATTTGCTTCAGTTGATTCATGGTAGCTCTATCAGTTGGT-3’；

F3-cfb:5’-AAGACTTCATTGCGTGCC-3’；

B3-cfb:5’-AACGTGTATTCCAAATTTCCTT-3’；

LF-cfb:5’-TGATTGCTTCAATCACATCTGT-3’；

LB-cfb:5’-TCAAGTTAACGATGTAAAGGCA-3’；

检测耐药基因ermB的LAMP引物组，包括一对内引物、一对外引物、一对环引物，其核苷酸序列如下：

FIP-ermB:5’-GAGCAACCCTAGTGTTCGGTGTGCGTCTGACATCTATCTGA-3’；

BIP-ermB:5’-TGCACACTCAAGTCTCGATTCAGTTTAGGATGAAAGCATTCCG-3’；

F3-ermB:5’-GTTGGGAGTATTCCTTACCATT-3’；

B3-ermB:5’-TGGTATGGCGGGTAAGTT-3’；

LF-ermB:5’-GGTACGCTTGTAGAATCCTTCT-3’；

LB-ermB:5’-GCAATTGCTTAAGCTGCCA-3’；

检测耐药基因ermC的LAMP引物组，包括一对内引物、一对外引物、一对环引物，其核苷酸序列如下：

FIP-ermC:5’-TGGAAATTATCGTGATCAACAACCTTGAATTAGTAAAGAGGTGT-3’；

BIP-ermC:5’-AAGTACGGATATAATACGCAAAAGTAATGCCAATGAGCGTT-3’；

F3-ermC:5’-ATCTGATAAGTGAGCTATTCAC-3’；

B3-ermC:5’-TTTGAAATCGGCTCAGGAAA-3’；

LF-ermC:5’-CGTGGAATACGGGTTTGCTA-3’；

LB-ermC:5’-ATGGTCTATTTCAATGGCAGTT-3’；