[发明专利]一种制备（R）-2-氯-1-（3;4-二氟苯基）乙醇的方法在审
| 申请号： | 201710784540.7 | 申请日： | 2017-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN109439696A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 竺伟;包蕾;胡集铖 | 申请（专利权）人： | 尚科生物医药（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12P7/22 | 分类号： | C12P7/22 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201318 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 二氟苯基 制备 乙醇 酮还原酶 基因工程技术 氨基酸序列 医药中间体 原子利用率 后处理 产物分离 催化作用 环境友好 酶法制备 工艺流程 手性醇 提纯 底物 乙酮 催化 筛选 转化 | ||
1.一种制备（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的方法，其特征在于：2-氯-1-( 3 ,4-二氟苯基)乙酮在酮还原酶催化作用下，转化为（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇，所述酮还原酶的氨基酸序列如（a）或（b）所述：
（a）、所述酮还原酶具有如表SEQ ID No.2 所记载的氨基酸序列；
（b）、所述酮还原酶为将表SEQ ID No.2 中的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且能催化2-氯-1-( 3 ,4-二氟苯基)乙酮转化为（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的酮还原酶。
2.如权利要求1所述的制备（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的方法，其特征在于：（b）所述的酮还原酶的氨基酸序列与（a）所述酮还原酶的氨基酸序列具备90%以上的同源性，且能催化2-氯-1-( 3 ,4-二氟苯基)乙酮转化为（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇。
3.如权利要求1所述的制备（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的方法，其特征在于：所述酮还原酶的基因序列如下（c）或（d）所示：
（c）、基因的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.1所示基因序列；
（d）、与（c）具有90%以上的同源性，且能催化2-氯-1-( 3 ,4-二氟苯基)乙酮转化为（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的酮还原酶的基因序列。
4.如权利要求1所述的制备（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的方法，其特征在于：2-氯-1-( 3 ,4-二氟苯基)乙酮在酮还原酶催化作用下，转化为（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇，步骤包括：将2-氯-1-( 3 ,4-二氟苯基)乙酮、酮还原酶酶粉或含有酮还原酶的细胞、缓冲剂一起配置成水/异丙醇混合溶液，反应得到产物。
5.如权利要求4所述的制备（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的方法，其特征在于：所述2-氯-1-( 3 ,4-二氟苯基)乙酮浓度为1～200g/L；酮还原酶酶粉浓度为2～10g/L或含有酮还原酶的细胞的浓度为10～50g/L。
6.如权利要求4所述的制备（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的方法，其特征在于：所述水/异丙醇溶液中水与异丙醇体积比为1:0.3～0.5。
7.如权利要求4所述的制备（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的方法，其特征在于：反应温度为24～45℃。
8.如权利要求4所述的制备（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的方法，其特征在于：反应时间为5～36h。
9.如权利要求4所述的制备（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的方法，其特征在于：反应液中还添加有辅因子，所述辅因子选自NAD+、NADH、NADP+和NADPH 的任意一种或它们的组合物。
10.如权利要求4所述的制备（R）-2-氯-1-（3,4-二氟苯基）乙醇的方法，其特征在于：所述含有酮还原酶的细胞选自基因工程改造的酵母菌或大肠杆菌。
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