[发明专利]人胱抑素C胶体金定量检测卡

说明书

本发明涉及新型的人胱抑素C胶体金快速检测试纸卡及其用途，属于免疫化学领域。本发明制备了多种抗体，并进行配对筛选，获得灵敏度及特异性均能满足需求的抗体组合(C12及C14)；同时其方便大量生产，可满足日后大规模临床应用的需求。对上述抗体组合进行检测体系的调试优化工作，获得操作简便，灵敏度，特异性及相关检测性能可满足人临床样本检测的人胱抑素C的胶体金快速检测试纸卡。并且针对性的筛选得到了制备试纸卡所适用的各类缓冲液，经制备的的检测卡变异系数CV10％、准确度偏差B5％、灵敏度为0.2mg/L。

技术领域

本发明属于免疫化学领域，具体的涉及两种抗人胱抑素C(CysC)抗体及其制备方法以及上述抗体在人胱抑素C检测中的应用。

背景技术

胱抑素C(Cystatin C，CysC)由122个氨基酸组成，分子量为13.3KD，是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为γ-微量蛋白或γ-后球蛋白。CysC在体内以恒定速度产生并存在于各种体液中，尤以脑脊液和精浆中含量为高。循环中的CysC仅经肾小球滤过而被清除，且在近曲小管重吸收，但重吸收后被完全代谢分解，不返回血液，因此，其血中浓度由肾小球滤过率决定而不依赖任何外来因素(如性别、年龄及饮食等)的影响，是一种反映肾小球滤过率变化的理想标志物。血清肌酐(Scr)、尿素(Urea)、内生肌酐清除率(Ccr)等肾脏清除率指标受许多肾外因素，如年龄、性别、身高、肌肉量、膳食结构、药物等以及肾小管对肌酐的分泌的影响，而CysC不受上述因素的影响。研究表明，血液CysC参考浓度一岁后稳定在成人水平，一直到六十岁左右，且无性别差异。亦有研究表明，与其他指标相比，CysC检出糖尿病肾病的灵敏度为40％，特异性为100％，因此可通过定期检测糖尿病患者血液中CysC浓度变化以观察是否有糖尿病微血管病变的发生。另外，血清中CysC室温可稳定两天，0℃至20℃可稳定7天，在-80℃可稳定6个月，且反复冻融对测定值无显著影响。综上各种指标使得CysC成为反映肾小球滤过情况的重要敏感指标。

鉴于CysC在反映肾小球滤过率方面的优越性，制备CysC抗体并用于制备CysC定量检测试剂盒具有重要的临床应用价值。胶体金定量检测法使用方便易于推广且成本较低，可满足疾病指标的定量检测，适合于基层医疗系统的即时检验。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供能有效的、特异性结合人胱抑素C的抗体。更具体地说：

本发明的第一目的在于提供两种抗人胱抑素C抗体。

第一种抗人胱抑素C抗体(C12)，

其重链可变区含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2和/或如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；

以及其轻链可变区序列含有以下的互补决定区：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2和/或如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。

优选的HCDR1～HCDR3、LCDR1～3的核苷酸序列如序列SEQ ID NO：17～22所示。

优选的是本发明中的C12抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，重链可变区和轻链可变区通过连接短肽直接融合，其氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示。

更优选的，C12抗体重链可变区核苷酸序列如SEQ ID NO:23所示，轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:24所示，重链可变区和轻链可变区通过连接短肽直接融合，其核苷酸序列如SEQ ID NO:36所示。

第二种抗人胱抑素C抗体(C14)，