[发明专利]岩藻糖基转移酶及其应用

权利要求书

1.编码具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性并具有将岩藻糖残基转移至乳糖的能力的多肽并且包括选自由以下各项组成的组中的序列的多核苷酸在生产2’-岩藻糖基乳糖中的应用：

a)随附序列表中的SEQ ID No.1；

b)与SEQ ID No.1互补的核酸序列；

c)在严格条件下与a)和b)中限定的所述核酸序列或它们的互补链杂交的核酸序列，

或者包含所述多核苷酸的载体在生产2’-岩藻糖基乳糖中的应用，

或者具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性并具有将岩藻糖残基转移至乳糖的能力的多肽在生产2’-岩藻糖基乳糖中的应用，所述多肽由选自以下组中的氨基酸序列组成，所述组由以下各项组成：

(a)在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列；

(b)在SEQ ID No.2中所示的所述氨基酸序列的等位基因变体的氨基酸序列，其中，所述等位基因变体由核酸分子编码，所述核酸分子在严格条件下杂交至在SEQ ID No.1中所示的核酸分子的相反链；

(c)在SEQ ID No.2中所示的所述氨基酸序列的同源体或具有与SEQ ID No.2至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中，所述同源体由核酸分子编码，所述核酸分子在严格条件下杂交至在SEQ ID No.1中所示的所述核酸分子的相反链；以及

(d)在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列的片段，其中，所述片段包括至少10个连续的氨基酸。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述岩藻糖基化寡糖的生产通过编码所述α-1,2-岩藻糖基转移酶的所述多核苷酸的异源或同源表达进行。

3.用于生产2’-岩藻糖基乳糖的方法，包括以下步骤：

a).提供具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的多肽，所述多肽由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列选自由以下各项组成的组：(a)在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列；(b)在SEQ ID No.2中所示的所述氨基酸序列的等位基因变体的氨基酸序列，其中，所述等位基因变体由核酸分子编码，所述核酸分子在严格条件下杂交至在SEQ ID No.1中所示的核酸分子的相反链；(c)在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列的同源体或具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中，所述同源体由核酸分子编码，所述核酸分子在严格条件下杂交至在SEQ ID No.1中所示的所述核酸分子的相反链；以及(d)在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列的片段，其中，所述片段包括至少10个连续的氨基酸；

b).在所述多肽催化所述岩藻糖残基从供体底物转移至受体底物的条件下，使步骤a)中的具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的所述多肽与包括所述供体底物和所述受体底物的混合物接触，所述供体底物包括岩藻糖残基，所述受体底物是乳糖，由此生产2’-岩藻糖基乳糖。

4.用于生产岩藻糖基化寡糖的方法，包括以下步骤：

a).在允许生产所述岩藻糖基化寡糖的适宜营养条件、以及允许具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的多肽表达的条件下，培养宿主细胞，所述宿主细胞选自由酵母菌和细菌所组成的组中，并且包含以下序列，所述序列由编码具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的多肽并且包括选自由以下各项组成的组中的序列的多核苷酸组成：a)随附序列表中的SEQ ID No.1；b)与SEQ ID No.1互补的核酸序列；或c)在严格条件下与a)和b)中限定的所述核酸序列或它们的互补链杂交的核酸序列，或编码具有α-1,2-岩藻糖基转移酶活性的、具有与SEQ ID No.2至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的多肽的核酸序列，

其中，所述序列是所述宿主细胞的外源序列，以及其中，所述序列整合在所述宿主细胞的基因组中，或者含有包含所述多核苷酸的载体，其中，所述核酸序列可操作地连接至由所述载体转化的宿主细胞识别的控制序列；

b).与步骤a)同时或在步骤a)之后，提供供体底物以及包括单糖或寡糖的受体底物，以使所述α-1,2-岩藻糖基转移酶多肽催化岩藻糖残基从所述供体底物转移到所述受体底物，由此生产岩藻糖基化寡糖，其中所述供体底物是GDP-岩藻糖残基，所述单糖或寡糖选自由以下各项组成的组：乳糖、乳果糖、LacNAc Typ I、LacNAc Typ II、D-半乳糖和β-苄基乳糖；以及

c).从所述宿主细胞或其生长培养基中分离所述岩藻糖基化寡糖。