[发明专利]一种H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条及其应用

说明书

技术领域

本发明属于病毒检测领域，具体涉及一种H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条及其应用。

背景技术

禽流感(Avian influenza，AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽类高度接触性传染病，有16个HA亚型和10个NA亚型，禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)是养禽业毁灭性疾病之一，属于正粘病毒科流感病毒属(Influenza virus)，其感染范围较广，根据病毒致病性的不同，可分为高致病性禽流感病毒和低致病性禽流感病毒。低致病性的H9亚型禽流感病毒虽然不引起感染禽类的大量死亡，但是该病毒却在我国造成大范围的流行。我国自1994年首次报道鸡群分离到H9N2亚型AIV以来，H9亚型低致病性AIV广泛存在于我国大部分地区，给我国的养禽业造成巨大经济损失。

目前，针对AIV的检测主要是通过病原分离和血清学试验，这些方法耗时、费力，在实际应用中对混合感染的AIV的检测具有一定的局限性。实时荧光定量PCR是将普通PCR方法与荧光检测方法相结合，通过在PCR反应体系中加入能与扩增模板特异性结合、并标有荧光基团的探针，通过荧光积累来实时监测PCR进程，结果可以直接通过电脑实时观察，不需要进行凝胶电泳，样品中相应病毒的含量可以根据荧光曲线的域值估算，实现了实时、定量检测的目的，但所需检测仪器昂贵，实验室条件严苛，不易在基层兽医部门推广。胶体金检测法检测灵敏度太低，很容易造成漏检。因此急需要一种能够快速简便、检测成本低、检测效率高、灵敏度高的H9亚型禽流感病毒的检测已经成为行业内的一大问题。

发明内容

基于荧光微球的免疫层析检测技术相较胶体金检测灵敏度可提高10倍-100倍，既能实现现场检测，又能够实现超灵敏检测，是取代禽流感胶体金低灵敏检测的必然趋势。通过制订超前的、达到国际领先水平的禽流感病毒系列荧光现场检测标准，可切实提高处置禽流感突发公共事件的能力，将禽流感突发公共事件造成的影响降到最低限度。

即，本发明的目的在于提供一种H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条，包括背衬(1)、吸水纸垫(7)、纤维素膜(2)、样品垫(4)、以及喷涂有荧光微球标记H9亚型禽流感病毒单克隆抗体(2G4)的荧光标记垫，纤维素膜(2)位于背衬(1)上，荧光标记垫(3)的右侧位于纤维素膜(2)上表面的左侧，荧光标记垫(3)的左侧伸出到纤维素膜(2)外，样品垫(4)的左侧位于荧光标记垫(3)上，样品垫(4)的右侧伸出到荧光标记垫(3)外，吸水纸垫(7)的左侧位于纤维素膜(2)上表面的右侧，吸水纸垫(7)的右侧伸出到纤维素膜(2)外；纤维素膜(2)的上表面从左到右依次设有另一株H9亚型禽流感病毒单克隆抗体(1C3)层及羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层，其中H9亚型禽流感病毒单克隆抗体(1C3)层上设有检测线(5)，羊抗Balb/c小鼠免疫球蛋白层上设有对照线(6)。

优选地，本发明所述的H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述纤维素膜(2)为硝酸纤维素膜。

优选地，本发明所述的H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述硝酸纤维素膜的型号为硝酸纤维素膜140。

优选地，本发明所述的H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述纤维素膜(2)的厚度为0.2mm、宽度为3.5mm。

优选地，本发明所述的H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述荧光微球标记H9亚型禽流感病毒抗体中荧光微球为平均直径为110nm、羧基修饰的荧光微球。

优选地，本发明所述的H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述荧光微球与H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的质量比例为5:0.37。

优选地，本发明所述的H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述检测线喷涂H9亚型禽流感病毒抗体的包被量为0.5μl/cm～1.5μl/cm；质控线用于划膜的羊抗鼠二抗的包被量为0.5μl/cm～1.5μl/cm。

优选地，本发明所述的H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述检测线用于划膜的禽流感病毒单克隆抗体(1C3)的包被浓度为1.0mg/ml～2.5mg/ml；荧光微球与H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体(2G4)偶联物的喷量为2.0μl/cm～3.0μl/cm。

优选地，本发明所述的H9亚型禽流感病毒荧光层析试纸条中，所述质控线喷用于划膜的羊抗鼠二抗的浓度为0.5mg/ml～2mg/ml